福林酚法测蛋白含量步骤

福林酚法测蛋白含量早是由Lowry确定的测定蛋白质浓度的基本方法。以后在生物化学领域得到广泛的应用。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。福林酚法测蛋白含量原理：蛋白质与福林酚试剂反应,生成深蓝色复合物.蓝色的深浅与蛋白质含量成正比.可用分光光度计于500nm波长下进行测定.与标准曲线对照,而确定蛋白质含量.福林酚法测蛋白含量所需试剂Folin—酚试剂：1.试剂甲1)4%碳酸钠溶液2)0.2...

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IPTG诱导蛋白表达步骤说明

异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）是一种作用*的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。当有乳糖存在时，lac操纵子（元）即可被诱导。在这个操纵子（元）体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经b－半乳糖苷酶催化，转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。材料1、诱导表达材料(1)LB（Luria—Bertani）)培养基酵母膏(Yeastextract)5g蛋白胨(Peptone)10gNaCl1...

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IPTG诱导原理

异丙基-β-D-硫代半乳糖苷,英文名称IPTG。为安慰性诱导物，X-gal为生色底物，二者共同用于蓝白斑筛选。IPTG可诱导载体lac操纵子DNA区段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段，该片段可与宿主细胞编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内互补(α互补)。IPTG诱导原理先E.coli的乳糖操纵子（元）含Z、Y及A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节?基因I。I基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使操纵子（元）受...

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关于CCK8实验步骤的叙述

CCK-8为细胞增殖检测试剂盒，细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。必须强调指出，通过细胞分裂，可以将复制的遗传物质，平均地分配到两个子细胞中去。可见，细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。CCK8实验步骤如下。CCK-8实验步骤1、在96孔板中配置100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（37℃，5%CO2）。2、向培养板加入10μl不同浓度的待测物质。3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。4、向...

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CCK-8实验注意事项及相关问题

CellCountingKit-8简称CCK-8试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验。活力计算：.细胞活力（％）=[A(加药)－A(空白)]／[A(0加药)－A(空白)]×100A（加药）：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度...

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IPTG配制的方法及使用说明

IPTG是一种作用*的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。IPTG溶液的配制很简单：在8ml蒸馏水中溶解2gIPTG后，用蒸馏水定容10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。IPTG的使用方法：先把IPTG配制成24mg/ml（100mM）的水溶液，并进行过滤除菌后保存。然后在100ml的琼脂培养基中，加入100μl的上述溶液、200μl的X-Gal（20?mg/ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100μl的Amp（100mg/...

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结晶紫染液的配制方法

结晶紫染色液(CrystalVioletStainingSolution)是一种组织或细胞染色时常用的可以把细胞核染成深紫色的染色液。结晶紫是一种碱性染料，可以和细胞核中的DNA结合，从而产生细胞核染色。结晶紫染液的配制方法如下：结晶紫染液的配制结晶紫(crystalviolet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL将两液混匀置24h后过滤即成。结晶紫染液使用方法1.样品处理a)对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟。换...

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结晶紫指示剂变色范围是多少

结晶紫（又叫甲基紫，俗名紫药水）pH0.5(绿)～2.0(蓝)。以冰醋酸作溶剂，用酸滴定液滴定碱时，常用的指示剂为结晶紫，还有α－萘酚苯甲醇（0.2％冰醋酸溶液，其碱式色为黄色，酸式色为绿色）和喹哪啶红（0.1％甲醇液，其碱式色为红色，酸式色为无色）结晶紫性状:具有金属光泽的暗绿色结晶形粉末。熔点为215℃（分解）。溶于水、乙醇和三氯甲烷,溶液呈紫色。不熔于，浓酸中呈黄色，当pH值增大时其颜色变化是黄→绿→蓝→紫.与Sn4＋、Tl3＋、Au3＋和Sb3＋的卤络阴离子及MoO、...

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