核酸变性预制胶在分离片段DNA分子时效果很好,分辨率很高,甚至相差1bp的DNA的片段都能分开,一个标准点样孔中可以容纳相对大量的DNA。所以常被用于蛋白印迹实验、遗传图谱构建、数量形状基因定位、标记辅助选择等生物多样性研究等。
核酸变性预制胶的操作步骤:
一、非变性预制胶:
1、准备样品:将样品和loadingbuffer(5×)按照4:1混合均匀。
2、准备1×runningbuffer:取200ml的5×TBEbuffer,加入去离子水至1L,制备成1×TBEbuffer。
3、将预制胶装入兼容的电泳槽中,加入电泳缓冲液,再缓慢地将梳子拔出。
4、上样:在梳孔内加入适当浓度和体积的DNA样品。
5、电泳条件:150V,50~75min(电泳时间取决于凝胶浓度)
6、电泳结束,取出凝胶。
二、尿素变性预制胶:
1、准备样品:将样品和UREA-TBEloadingbuffer(5×)按照4:1混合均匀,100℃下加热3-5min。
2、准备1×runningbuffer:取200ml的5×TBEbuffer,加入去离子水至1L,制备成1×TBEbuffer。
3、将核酸变性预制胶装入兼容的电泳槽中,加入电泳缓冲液,再缓慢地将梳子拔出。
4、上样:用1×TBEbuffer反复冲洗梳孔以清除梳孔内的尿素,在梳孔内加入适当浓度和体积的DNA样品。
5、电泳条件:150V,50~75min(电泳时间取决于凝胶浓度)
6、电泳结束,取出凝胶。