关于核酸变性预制胶的操作步骤，你了解多少？

　　核酸变性预制胶在分离片段DNA分子时效果很好，分辨率很高，甚至相差1bp的DNA的片段都能分开，一个标准点样孔中可以容纳相对大量的DNA。所以常被用于蛋白印迹实验、遗传图谱构建、数量形状基因定位、标记辅助选择等生物多样性研究等。

　　

　　核酸变性预制胶的操作步骤：

　　

　　一、非变性预制胶：

　　

　　1、准备样品：将样品和loadingbuffer（5×）按照4：1混合均匀。

　　

　　2、准备1×runningbuffer：取200ml的5×TBEbuffer，加入去离子水至1L，制备成1×TBEbuffer。

　　

　　3、将预制胶装入兼容的电泳槽中，加入电泳缓冲液，再缓慢地将梳子拔出。

　　

　　4、上样：在梳孔内加入适当浓度和体积的DNA样品。

　　

　　5、电泳条件：150V,50~75min（电泳时间取决于凝胶浓度）

　　

　　6、电泳结束，取出凝胶。

　　

　　二、尿素变性预制胶：

　　

　　1、准备样品：将样品和UREA-TBEloadingbuffer（5×）按照4：1混合均匀,100℃下加热3-5min。

　　

　　2、准备1×runningbuffer：取200ml的5×TBEbuffer，加入去离子水至1L，制备成1×TBEbuffer。

　　

　　3、将核酸变性预制胶装入兼容的电泳槽中，加入电泳缓冲液，再缓慢地将梳子拔出。

　　

　　4、上样：用1×TBEbuffer反复冲洗梳孔以清除梳孔内的尿素，在梳孔内加入适当浓度和体积的DNA样品。

　　

　　5、电泳条件：150V,50~75min（电泳时间取决于凝胶浓度）

　　

　　6、电泳结束，取出凝胶。