PCR定量试剂盒为什么会检测出现假阳性，哪些原因造成的？

　　PCR定量试剂盒的基本原理就是在PCR扩增过程中，随着PCR循环数的递增，PCR产物不断积累，荧光信号也会相应的增加，这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测。

　　

　　PCR荧光定量是一种非常敏感的检测方法，但是实验室经常开展检测工作，一旦实验室管理和环境控制没有执行到位，就存在由于交叉污染出导致假阳性的风险。

　　

　　PCR定量试剂盒检测出现假阳性的常见原因：

　　

　　1、实验室污染是导致假阳性结果

　　

　　实验室如果长期检测阳性样本，扩增产物中高浓度的目的片段很容易扩散到空气中并不断累积导致气溶胶污染。

　　

　　2、荧光定量PCR仪性能不佳导致翘尾

　　

　　某些荧光定量PCR仪性能不佳，在反应后期出现非特异性翘尾峰。

　　

　　3、电压不稳导致的基线不稳定

　　

　　电压不稳定，会导致扩增基线不稳定。另外，临床实验室停电风险相对较高。建议这些实验室配备UPS紧急电源。

　　

　　4、样本或者气泡干扰

　　

　　反应体系中存在气泡或者某些样本含有特殊成分可能干扰实验，产生非特异性扩增曲线，这种扩增曲线通常不呈现典型的S型扩增曲线形态。

　　

　　5、定量试剂盒污染或者非特异性反应

　　

　　某些试剂盒没有在GMP车间进行生产，或者GMP车间生产过程中车间洁净度不够或人员操作不规范，在试剂盒生产过程中可能出现阳性核酸片段或者质粒污染反应体系的情况。

　　

　　某些PCR定量试剂盒的生产工艺不过关，可能出现非特异性翘尾现象。试剂盒中引物、探针等原料品质不过关，质量控制不严格，也可能导致非特异性反应。