丙酮酸脱氢酶活性检测试剂盒的检测步骤

  丙酮酸脱氢酶(PDH)是一种线粒体酶,可以催化丙酮酸盐向乙酰辅酶A和CO2的转化,同时还是联系三羧酸(TCA) 和糖酵解的媒介。该酶受到磷酸化作用的抑制,可在脱磷酸作用下激活。PDH的突变还与丙酮酸脱氢酶的效率（产生乳酸和神经机能障碍）和亚急性坏死性脑脊髓病有关。通过酶促分析,可以测定丙酮酸脱氢酶的活性,该反应会产生与所含的酶活性成正比的比色 (450 nm) 产物。一单位丙酮酸脱氢酶的定义为,37 ℃下,每分钟生成 1.0 Μmol 的NADH 所需的酶量。

  丙酮酸脱氢酶活性检测试剂盒的测定步骤：

  1、分光光度计预热30min以上，调节波长至605nm，蒸馏水调零。

  2、每个样本需要900μL工作液，按样本数加取出一定量的工作液于37°C (哺乳动物)或25°C (其他物种)中孵育5min。

  3、空白管:在1mL比色皿中加入900L工作液和50H水，混匀，立即记录605nm处初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，计算△A 空白=A1-A2。

  4、测定管:在1mL比色皿中加入900风工作液和50H样本，混匀，立即记录605nm 处初始吸光值A3和1min后的吸光值A4，计算△A测定=A3-A4。