将目标抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的抗体结合，然后加入微生物化的目标抗体，将未结合的生物素抗体洗净后，加入HRP标记和亲和素，再次洗涤后加入TMB底物显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度，计算样品浓度。
人抗胰蛋白酶elisa试剂盒储存及有效期：
1、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将TMB洗涤液，终止液保存于4℃，其他试剂保存于-20℃。
2、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。
elisa试剂盒的稳定性：
经测定，人抗胰蛋白酶elisa试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。
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