实时定量技术，是指在PCR体系中加入
赫斯特荧光染料，利用荧光信号积累实时监测整个进程，然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，具有特异性强、自动化程度高等特点。因此已得到广泛应用。
荧光染料的诸多特点使它可以用于多种应用，包括：qPCR，高分辨率DNA熔解曲线（HRM）分析，常规的DNA定量以及毛细管电泳。当染料和DNA结合后，其激发和发射光谱与荧光素以及荧光染料相似。
这使得该染料可以直接用于配置了488nm氩离子激光器或者此光谱区域内任何可见光激发装置的仪器。本身没有荧光，但和dsDNA结合后能发出高亮度的荧光，这种特性使它特别适合于实时定量PCR的应用。
另外，水溶性溶剂，如DMSO或者甘油，常被用来作为添加剂以稳定。这些组分以及pH值需要根据您所选用的聚合酶的特性进行优化。如果您使用常规非热启动Taq聚合酶，并配合使用，您将会获得比荧光染料更优的实验结果。
由于各种仪器的光学设置不同，因此当平行比较时，在不同仪器上的Ct值会有＋1或－1的微小差别。然而无论您使用哪种仪器，赫斯特荧光染料的熔解曲线分析中的荧光强度都远强于。
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