WB实验中没有阳性条带怎么办，如何解决？

　　WB实验的步骤较多，耗时均较长，且每步都影响其结果表现。我们将常见问题总结归纳，下面将对各问题进行分类总结，并对出现该现象的原因进行分析，给出相应的解决办法。

　　

　　无信号，没有阳性条带

　　

　　WB实验结果中常出现白板或者条带无信号响应现象，我们针对出现该现象可能的原因主要从抗体，抗原，实验操作和缓冲液几方面进行分析。

　　

　　1、抗体相关原因：

　　

　　WB中所用到抗体包括一抗和二抗，在该问题上，两个抗体方面可能存在的原因以及相对应的解决方法。

　　

　　解决办法：二抗选用不恰当，选择与一抗相匹配的二抗类型，二抗需和一抗宿主的物种相同。无足够量抗体结合目标蛋白，降低一抗稀释度；使用效价高的一抗；延长抗体孵育时间;膜充分浸润在液体中。

　　

　　2、抗原相关原因

　　

　　抗原即所需要检测目的蛋白，其相关原因可能是未被一抗识别或者是抗原量不足引起。

　　

　　解决办法：一抗不识别待检测的目的蛋白，参照数据库对比抗原序列和蛋白序列，选择合适一抗，确保会发生特异性反应，抗原量不足或降解，每条泳道上样量不低于20~30ug，使用蛋白酶抑制剂并设置阳性对照。

　　

　　实验操作规范对于实验结果也至关重要，且需要重复摸索。无条带出现可能是目标蛋白未从胶转移至膜上或者洗膜过度。

　　

　　WB实验结果中可能出现有目标蛋白条带，但是目标条带在膜上颜色较浅。该现象原因与无目标条带较为相似，可能导致该现象的原因我们也从4个方面进行分析，并给出相应的解决方法。