生化试剂盒常见问题

生化试剂盒通过化学反应/酶促反应或物质结构特点测定样本中物质含量或酶活；所用仪器一般为分光光度计和酶标仪，两者的测定原理都是 朗伯比耳定律: A=kbc，即当适当波长的一束平行单色光照射固定浓度均匀溶液时，其吸光度与光通过的液层厚度成正比。土壤、水质、动植物组织、血清、细胞细菌、食品等 样本均可以进行测定。

首先根据本实验的实际情况选择，实验室有酶标仪的且有该检测波长的可以选择微量法试剂盒；实验室有分光光度计的，且有相应规格的比色皿既 可以选择常量法也可选择微量法试剂盒。建议购买前先阅读的说明书，对其中自备的仪器和试剂进行确认。

如果收到试剂盒，暂时不用，可按照外包装上指示的温度统一保存；拆开包装后，请按照每个试剂的保存温度进行保存，有些试剂忌反复冻融； 有些试剂为粉剂，溶解之后性质不稳定。

一般生化试剂盒有效期为6个月，也有特殊货号生化试剂盒有效期为1年；具体以实际收到货物的标签信息为准。

强烈建议客户先拿出2-3个预期结果差别较大的样本做预实验。在实验的过程中，首先将试剂盒中的说明书通读一遍， 检查试剂盒中各成分的量与说明书符不符合，溶解或使部分试剂回复至室温，然后处理样本，样本提取完成后，再溶解一些粉剂，开始实验。

一般同一个系列的试剂盒中，酶活测定的提取液类似，含量测定的提取液类似。但具体的请具体查询。

新鲜样本和冷冻样本都可用于大多数指标的测定，有一些生理活性物质容易降解，建议用新鲜样本测定， 如辅酶Ⅰ、辅酶Ⅱ、谷胱甘肽、线粒体复合体等。冷冻样本建议在-70℃或者液氮中保存。一般样本在4度能都 保存一周，-20保存一个月，-80保存3个月

由于土壤颗粒大小不一致导致水分含量不一样，且取样量较少，为了保证测定的重复性，建议将鲜土风干并 过筛后取样。若用鲜土测定，需保证样本的颗粒大小一致水分含量相似，建议过40目筛后取样，且同时测定 的样本要保持一致，最好不要一组样本用风干土，一组用鲜土，风干后的土样在-20保存1个月测定大部分酶活 几乎不会有损失；某些土壤的成分如硝态氮、铵态氮等在风干过程中会发生显著变化，必须用新鲜样品进行分析。

样本研磨我们一般用到三种方法： 第一种：将研钵置于冰盒上匀浆即冰浴匀浆，在匀浆的过程中注意匀浆器浸于冰中，防止因为摩擦引起的温度过高，提取液可以在匀浆过程中或者匀浆后加入。 第二种：用液氮匀浆，液氮研磨前将样本洗净，尽量剪成小块，放入研钵中，加入液氮研磨，液氮挥散后尽快加入第二次液氮直至研磨成粉末状，避免其过程中 反复冻融，同时要做好保护措施，防止冻伤手指。完成后将粉末收集到离心管中加入缓冲液。样本可以提前称量号也可研磨完后称量。 第三种：使用匀浆机进行匀浆，将称好的组织放入离心管中，加入适量提取液，加入钢珠。并将模块提前遇冷，按照机器指示进行操作。一般的动物组织用 该方法效果尚可，有些机器对植物组织的处理效果不好。

使用分光光度计的用户，用蒸馏水或相应的有机试剂直接调零。使用酶标仪的用户，可以在一个孔里加入200μL的蒸馏水或去离子水，作为调零孔， 也可不用调零，后续计算中会有空白孔。

样本测定值若超出检测范围，可以将提取的上清液用提取液稀释后重新测定。一般从高到低，按照2倍，5倍，10倍，20倍的顺序，选择一个合适的稀释 倍数。样本测定值若低于检测范围，可以提高样本浓度，如称取0.2g样本加入1mL提取液匀浆，相当于将样本浓缩2倍。

（1）根据说明书中测定温度，提前打开保温设备（如水浴锅），设到温度，在达到温度后，把冷藏的试剂转移到保温设备中保温10-30分钟以上，以保证反应一开始，就在温度中进行。 （2）对于拥有酶标仪的用户，直接提前预热，在达到设定温度后，可以直接把预热后的试剂，加入酶标板，然后开始反应。 （3）在保温设备（水浴锅和金属浴，最好是前者）进行。注意提前对保温设备进行预热，达到设定温度后再进行反应。但是仅适用于能够终止的反应。 （4）对于瞬间完成的反应，或者对温度不敏感的反应，为了提高重复性，最好在同一温度下完成检测。例如打开空调，设定在室温，如25℃。 当然，所有控温设备，都要进行预热。

(1)50管的试剂盒，常量法试剂盒，用分光光度计检测。1mL的比色皿检测。 （2）100管的试剂盒，微量法试剂盒，用酶标仪（酶标板）或者分光光度计（0.25 mL比色皿）检测。

（1）50T/48S：50T指能够做50次测定，48S指可以测试48个样品。如果每个样品重复测定3次，那么只能测定16个样品。其中有2次测定用于空白管或者 对照管。值得特别注意的是，50T/24S中由于每个样品测定都需要做对照，因此能够测定样品的数量仅为8个（假设做3次重复） （2）100T/96S：100T指能够做100次测定，96S指可以测定96个样品，如果每个样品重复测定3次，那么只能测定32个样品。其中有4次测定用于空白管或 者对照管。 注意由于瓶璧和移液器吸附等，通常要比理论测定次数少1~3次。其它规格的含义依次类推。值得特别注意的是，100T/48S中由于每个样品测 定都需要做对照，因此能够测定样品的数量仅为16个（假设做3次重复）。

一般试剂为粉剂的，可能更多的考虑到配成溶液后的稳定性差，如NADH，或者和其他试剂溶解在一起会在不同的温度下有其他的化学反应。 -20℃保存的粉剂建议溶解后分装保存，避免反复冻融。