小鼠脂联素ELISA试剂盒

特异性：  没有检测到与任何其他细胞因子的交叉反应性。

储存：       存放在4 ℃ 的频繁使用，在-20 ℃ 很少使用。  避免多次冻融循环（随用湿冰）

有效期： 4个月，在4 ℃ 和8个月，在-20 ℃ 。

应用：  用于定量检测小鼠脂联素，血清，血浆，体液，组织裂解物或细胞培养上清。

注意事项应用套件

1 。在使用试剂盒，旋转管到管底，并关闭所有元件。

2 。重复以及检测标准和样品测试。

3 ，不要让96孔板中干，干板将活性成分失活板。

4 。为了避免边际效应的板孵化，由于温度差（反应可能会更强的边际井），ABC和TMB的解决方案摊薄预先加热，在37 ℃ 30分钟前使用。

 

实验步骤

ABC工作液和TMB彩色显影剂必须在使用前30分钟在37℃下保温。稀释样品和试剂时，必须将它们*和均匀地混合。标准小鼠脂联素检测曲线。用户将决定样品稀释倍数的粗略的估计。

1。的分装0.1毫升每20ng/ml，10ng/ml时，5ng/ml，2.5ng/ml，1.25ng/ml，0.625ng/ml，0.312 ng / ml的小鼠脂联素标准的解决方案，预涂96板。添加0.1ml的样品稀释缓冲液到控制（零井）。添加0.1ml的每个适当稀释的人血清样品，血浆，体液，组织裂解物或细胞培养上清液中的每个空井。请参见“示例稀释指引“上面的内容，我们建议每个小鼠脂联素标准溶液和每个样品一式两份测定。

2。密封板与盖和在37℃下孵育90分钟。

3。取下盖子，舍弃板的内容，涂抹到纸巾或其它吸水材料板。不要让我们的井*干燥，在任何时候。

4。添加生物素标记的抗0.1ml的 孵化板在37℃下60分钟。

5。三次用0.01M TBS或0.01M PBS洗板，每一次让留在洗涤缓冲液井1分钟。弃去洗涤液，或其他吸水纸巾上吸干板材料。

6。导入各孔中，并加入0.1ml的制备ABC工作液，在37℃下孵育板30分钟。

7。将板洗涤5次，用0.01M TBS或0.01M PBS，每一次让洗涤缓冲液的孔中逗留1-2分钟。弃去洗涤液和纸巾或其它吸水材料上涂抹板。

8。90微升制备TMB底彩色显影剂添加到每个孔中并孵育板在37℃下20分钟（深浅不一的蓝，可以看出，在井的四个集中的脂联素标准的解决方案;其他井没有明显的颜色）。

9。每孔加入0.1ml的准备TMB的一站式解决方案。颜色立即变成黄色。

10。阅读的OD在酶标仪在450nm处的吸光度，添加停止溶液后，在30分钟之内。

为了计算，（相对OD 450 ）=（的OD 450 ） - （的OD 450 ）。可以绘制成的相对OD 标准曲线。的小鼠脂联素浓度的样品可以被内插。      
 

注：如果测量的样品进行稀释，稀释前，乘以稀释倍数的浓度插值获得的浓度。

摘要

1。加入样品和标准品，并在37℃下孵育板90分钟。不要洗。

2。添加生物素化的抗体，并在37℃下孵育板60分钟。将板洗涤3次，用0.01MTBS。

3。加入ABC工作液，并在37℃下孵育板30分钟。将板洗涤5次，用0.01MTBS。

4。加入TMB底彩色显影剂，并在37℃下孵育板20分钟。

5。加入TMB一站式的解决方案和阅读。