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更新时间：2025-08-05
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1. Q：竞争ELISA、双抗夹心ELISA、间接ELISA都是什么？有什么区别？
A:
| 竞争ELISA | 双抗夹心ELISA | 间接ELISA | |
| 特点 | 包被抗体，标记抗原，样本中的抗原与酶标抗原竞争与固体抗体结合，标本中抗原量含量越多，结合在固相上的酶标抗原越少，最后的显色也越浅。 | 使用两个特异性单抗或者1个特异性单抗和1个特异性多抗，固相载体包被抗体，酶标记特异性抗体作为检测抗体。 | 固相载体包被抗原，酶标记二抗，主要用于测抗体。 |
| 优点 | 可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。 | 使用两个特异性抗体检测，特异性好。 | 使用酶标二抗增加了灵敏度，灵活度大，成本低。 |
| 缺点 | 整体的敏感性和专一性都较差。 | 成本高。 | 交叉反应几率升高。 |
| 用途 | 小分子抗原或者半抗原的定量检测，当抗原材料中干扰物质不易去除或不易得到足够的纯化抗原时，多用于此方法检测；一般小分子激素及药物常用此法测定。 | 用于抗原的定量检测。 | 通过检测血清中的抗体来检测病毒，如第1，2代艾滋病诊断试剂。常用于免疫动物血清中抗体含量的测定。 |
2. Q：为什么推荐双波长检测（450nm和630nm）。
A：ELISA实验终止后形成的是黄色物质，该物质需要在450nm处测定其吸光度，630nm的吸光度只是检测板子本身的吸光度，与酶标板的材质有关，测OD630可以消除各个板孔不干净等非特异性因素引起的误差。如果所使用的酶标仪不可以检测OD630也没有关系，只读取OD450的结果也可以。
数据处理时所用的矫正值，是把所有孔的OD值减去标准曲线0浓度孔的OD值，进一步计算结果。
3. Q：CV值指的是什么？
A：CV值是统计学中的一个概念，中文是变异系数，可以认为变异系数和极差、标准差和方差一样，都是反映数据离散程度的绝对值。CV值越小，说明数据的波动程度越小。在描述板内、板间实验结果是否一致时常用到CV值，其越小，说明批内及批间差越小，试剂盒质量越好。
4. Q：标曲拟合方式。
A：ELISA数据处理中所谓的“标准曲线"其实称为拟合曲线比较合适。标准曲线的拟合方式有多种，直线、二次曲线、三次曲线、指数、对数等虽都可用于ELISA及其它生物学反应中的曲线拟合，但都只适用于曲线的一部分，有的适用于前半段，有的适用于后半段，有的适用于中间一段，而四参数Logistic曲线拟合则对曲线的全部都有较好的适用性。目前国际上流行的免疫检测拟合方式是“四参数Logistic拟合"，用这种拟合方式往往能够比较精确的反映浓度和吸光度的曲线关系，从而进一步比较正确地获得样品中待测物质的浓度值。
建议用专门的软件进行数据处理，这样可以快速、准确地计算出结果。
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