单层贴壁细胞总蛋白的提取

本篇文章详细介绍了单层贴壁细胞总蛋白的提取方法和步骤，仅供参考。另外索莱宝公司提供细胞总蛋白提取试剂盒，更加方便老师和同学顺利完成单层贴壁细胞总蛋白的提取实验。

    1. 倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。

    2. 每瓶细胞加 3ml 4 ℃预冷的 PBS （ 0.01M pH7.2 ～ 7.3 ）。平放轻轻摇动 1min 洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。将 PBS 弃净 后把培养瓶置于冰上。

    3. 配制裂解试剂，现用现 配制 按 1ml RIPA + 25 μ l PMSF （ 100mM ） +110 μ l Pi （ PhosSTOP 磷酸酶抑制剂），摇匀置于冰上。（ PMSF 要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。）

    4. 每瓶细胞加 100 μ l 的裂解液，用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧（动作要快），于冰上裂解 30min ，为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。

    5. 裂解完后，然后用枪将细胞碎片和裂解液移至 1.5ml 离心管中。（整个操作尽量在冰上进行）

    6. 于 4 ℃下 12000rpm 离心 15min 。（提前开离心机预冷）

    7. 将离心后的上清分装转移倒 0.6ml 的离心管中放于 -80 ℃保存。