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当前位置:首页技术文章胞核/胞浆蛋白分离提取实验小贴士(二)
Solarbio EX2652-Ultra胞浆/胞核蛋白提取试剂盒优势
1.提取效率高
1)操作简便:提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中提取胞浆/胞核蛋白的方法。
2)提取快速:能够在较短时间内完成胞浆/胞核蛋白的提取。
2. 提取纯度高
试剂盒中含有特殊的非离子型去污剂以及蛋白磷酸酶和蛋白酶抑制试剂等成分,能够在非变性和低渗的条件下裂解细胞,去除大部分膜蛋白,释放完整的细胞核,从而提高胞浆/胞核蛋白的纯度。
3.适用范围广
1)样本类型多样:适用于多种样本类型,包括哺乳动物细胞、新鲜组织等。
2)下游应用广泛:提取的核蛋白可用于多种下游实验,如Western Blot、免疫共沉淀、EMSA、转录因子活性分析、酶活性测定等。
4.保持蛋白活性
1)活性维持:在提取过程中,试剂盒的配方能够保持胞浆/胞核蛋白的天然活性。
2)抑制降解:试剂盒中含有蛋白酶抑制剂混合物,可有效阻止蛋白酶对蛋白的降解,从而保证提取的蛋白具有较高的活性。
5.安全性
低毒试剂配方,没有添加有毒试剂(如苯酚、氯仿),采用温和去垢剂和无放射性成分,保障实验人员安全。
组织实验结果
分别取等量的60mg组织,使用3种不同的试剂盒——A Company、B Company、Solarbio按照各自说明书进行胞浆胞核蛋白提取,使用5种不同的细胞核蛋白抗体进行WB检测,以核蛋白为检测指标的WB检测结果如图1所示。
结果表明,Solarbio的检测结果优于国产A Company、国产B Company尤其是Histone H3、Histone H2A.X和Histone H3.1。
此外,我们使用LDHA细胞浆蛋白抗体进行WB检测,以浆蛋白为检测指标的WB检测结果如图1所示。
结果表明,三种试剂盒的胞浆蛋白提取效果相当,且核质分离效果明显,交叉污染率极低。
图1 不同试剂盒的核浆标志性抗体WB检测结果
细胞实验结果
分别取等量的(2×106个)HEK 293T细胞,使用3种不同的试剂盒——A Company、B Company、Solarbio按照各自说明书进行胞浆胞核蛋白提取,使用3种不同的细胞核蛋白抗体进行WB检测,以核蛋白为检测指标的WB检测结果如图2所示。
结果表明,Solarbio的检测结果优于Company、B Company(尤其是LMNB2、Lamin B1);Histone H3检测结果相近,效果相当,对于浆蛋白中的污染情况三种试剂盒均出现,其中Solarbio的胞浆蛋白污染,效果低于A Company、B Company。
此外,我们使用LDHA细胞浆蛋白抗体、VDAC线粒体蛋白抗体进行WB检测,检测指标的WB检测结果如图2所示。
结果表明,Solarbio、B Company两种试剂盒的胞浆蛋白提取效果相当,均优于A Company,且核质分离效果明显,交叉污染率极低。
图2 不同试剂盒的核浆标志性抗体WB检测结果
总结
与A Company、B Company相比,Solarbio提取的核蛋白WB效果明显,核质交叉污染率低,且适用于IP、EMSA、Footprinting等其它实验,所以客户可根据实验目的选择对应的试剂盒。
此外,Solarbio已推出精品抗体活动,本实验中所使用的抗体均为Solarbio研发的精品抗体,详情见表1,欢迎客户选购。
实验所用Solarbio精品抗体和Ultra系列蛋白提取试剂盒货号与名称
货号
名称
K200033M
ActivAbTMAnti-Histone H3.1
Monoclonal Antibody
K001453M
ActivAbTMAnti-H2AFX
(Phospho-Ser139)
K000182M
ActivAbTMAnti-LMNB2
K200032M
ActivAbTMAnti-Lamin B1
K106608P
ActivAbTMAnti-LDHA
Polyclonal Antibody
K106833P
ActivAbTMAnti-VDAC1
EX2562
Ultra胞浆/胞核蛋白提取试剂盒
EX1471
Ultra细胞核蛋白提取试剂盒
EX1321
Ultra线粒体蛋白提取试剂盒
EX1241
Ultra高尔基体蛋白提取试剂盒
EX2353
Ultra叶绿体蛋白提取试剂盒
EX1231
Ultra溶酶体蛋白提取试剂盒
EX1201
Ultra全血蛋白提取试剂盒
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