实验干货：液相色谱压力高了怎么办？

实验干货

液相色谱压力高了怎么办

●SOLARBIO

大家有没有经常遇到这类问题呢？只要开展带基质样本检测、新产品开发相关试验，液相色谱大批量检测样品之后，系统压力就会慢慢走高，直至触达压力极限，随之漏液、仪器接连报错。哪怕样品前处理已经最大限度净化，仍旧无法杜绝。遇到这种情况不用慌，下面小编结合实操经验，细致梳理液相色谱压力过高的原因以及应对方案。

#可怕的高压力图

一、压力升高从哪儿来？

液相系统压力取决于流速、流动相粘度、管路内径和色谱柱反压。

但其实做得多了的友友都知道，压力逐渐升高，问题基本都出在色谱柱身上！很少情况是泵或检测器的原因~

比如有一次实验，色谱柱压力越来越高，我们停下序列，反复排查，最后拆开色谱柱，发现入口端筛板处肉眼可见发生了填料塌陷。

结合整个前处理以及进样过程，我们分析可能有这么几种原因：

流动相pH过高

实验使用的流动相pH达到了10左右，大概率是这个原因导致填料塌陷；高pH环境下，硅胶中的硅氧键被氢氧根攻击断裂，填料表面甚至内部逐渐溶解。柱头首当-其冲，溶解后填料体积收缩、颗粒变小，自然就塌了。

缓冲盐的析出

因为HPLC检测方法中流动相有硼-酸盐体系，有可能是梯度结束时高比例的有机相冲洗不彻-底，盐微粒残留在柱前，逐渐使压力升高。

样本里的微粒

虽然过0.22µm滤膜，但样本里细微的不溶物、杂质等仍然可能缓慢堆积在柱头筛板上。

强保留的“脏东西"

比如一些脂溶性成分、色素等，慢慢吸附在柱头，造成原孔径变小，压力自然升高。

二、如何系统化排查原因？

根据以往经验，我们的排查顺序大致为以下流程:

1检查：观察压力变化

措施

操作：

观察压力是突然飙升还是缓慢爬升

判断与处理：

• 缓慢爬升 → 多与污染、结晶有关

• 瞬间飙升 → 可能是某处突然堵塞

2检查：断开色谱柱，接两通

措施

操作：

断开色谱柱，用两通直接连接管路

判断与处理：

• 压力仍高 → 问题在泵、进样器或管路
• 压力骤降 → 问题在色谱柱部分

3检查：溶剂瓶及吸滤头

措施

操作：

观察瓶内有无漂浮物或絮状物，吸滤头是否有颜色变化

判断与处理：

堵塞则清洗吸滤头或直接更换

4检查：在线脱气机

措施

操作：

观察流动相中是否有明显气泡流出

判断与处理：

气泡多 → 检查脱气机真空度或管路，必要时清洗或更换脱气管

5检查：在线过滤器/保护柱

措施

操作：

• 取下滤片，超声清洗后装回

• 更换柱芯后压力恢复，说明旧柱芯已饱和

判断与处理：

若压力下降 → 滤片堵塞/柱芯污染，建议定期清洗滤片或更换柱芯

6检查：混合器 / 泵密封垫 / 进样针座

措施

操作：

• 混合器内置滤芯：更换或超声
• 泵密封垫：检查磨损，更换密封垫并清洗泵头
• 针座：拆下反冲或用热水超声

判断与处理：

逐一排查，哪个处理后压力下降就是问题源

7 检查：色谱柱

措施

操作：

断开色谱柱后，压力骤降 → 问题在色谱柱部分

判断与处理：

高比例水低流速冲洗色谱柱；或进行反冲（仅限允许反冲的色谱柱）；或更换色谱柱

特别提醒：

高pH流动相使用后若发生填料塌陷，反冲基本无效，只能更换。

三、仪器保护+样本前处理双管齐下

最-常用的方式是加在线过滤器或保护柱，有了这种硬件防护，对色谱柱的保护效果会好很多。

在线过滤器

可以拦截管路中的磨损碎屑和流动相颗粒，压力异常时可以超声清洗滤片，重复使用；或直接换新滤片（一个滤片也不贵）。

保护柱

要与分析柱同填料，可吸附强保留杂质，柱芯通常不可清洗，只能更换。

除了硬件防护，样本前处理同样关键，具体可以做好以下几点。

离心+过滤

高速离心，取上清过0.22µm滤膜，这些都是众所-周知的基本操作啦。

SPE净化

复杂的样本最好加一步 C18 或 HLB 等固相萃取步骤（Solarbio 各种 SPE 小柱等您来选哦）。

溶剂匹配

样本溶剂比例尽量与初始流动相一致，可以防止进样瞬间析出结晶。

一点小结 

压力升高是“信号"，不是“终点"

很多友友看到压力高就很焦虑，别焦虑，压力变化是仪器给出的重要健康信号~通过系统排查、硬件保护、日常维护，绝大多数压力问题都可以在早期解决。

希望今天的经验能帮大家少走一些弯路！也欢迎实验室同行留言交流遇到的奇葩仪器故障，互相学习，总比一个人闷头琢磨要强得多！