细胞冻存液的配置以及冻存步骤

冻存液先关键在于冷冻保护剂，一般常用DMSO此类渗透性保护剂，一般是以9份小牛血清或细胞培养液与1份的DMSO混合而成，现配现用或配置后放入普通冰箱冰盒内冷冻保存，使用前于室温水浴融化。关键在于DMSO的终浓度为10％，对于普通细胞来说，小牛血清浓度似乎高点越好，但没有这个必要，用细胞培养液即可。

细胞冻存
1.预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存预冷；
2.用胰酶对细胞进行消化：倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基，PBS冲洗两次，用胰酶消化细胞（尽可能温和）；
3.再次用*培养液悬浮细胞，将预冷的冻存液加入消化*的细胞中，用滴管轻轻吹打混匀。
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液，密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力，如果有程序降温器（放在-80℃冰箱过*，放入液氮罐）好；或者可以在4℃，2h；然后转到-20℃，2h；-80℃，2h；放入液氮罐。

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