洗涤是elisa试剂盒测定过程中决定实验成败的一个关键步骤。洗涤可采用洗板机或手工洗涤两种方式,手工洗板则分为浸泡式和流水冲洗式洗涤。无论洗板方式如何,在向板孔内注液时应当避免气泡残留孔内,否则会因洗涤液难以进入孔中而影响洗涤效果。
洗涤目的是去除反应体系中与反应无关的成分、未结合的酶结合物以及反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。由于抗原和抗体的包被通常是在碱性条件下与固相的疏水键相互作用而被动吸附于其上的,因此必须注意非离子去垢剂的使用浓度,常用的洗涤液是含0.05%吐温20的0.02mol/L, pH 为7.4的 PBS液,如果洗涤液中的吐温20超过 0.2%,可使包被于固相上的抗原或抗体解吸附而影响实验的测定下限。
洗涤是重要的步骤之一,如果洗涤出现了差错,就会影响到实验的质量。