蛋白酶K的作用及使用方法

白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶，从林伯氏白色念球菌中纯化得到，它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。由于蛋白酶K具有降解天然蛋白质的能力，因此多用于生物样品中蛋白质的一般降解；其消化过程中通常加入EDTA以抑制依赖于mg2+的核酸酶的作用。蛋白酶K的一般工作浓度是50-100μg/ml。在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性。

蛋白酶K可替代 DEPC 处理 RNA 抽提用的离心管和枪头，实现灭活 RNase A 的目的，也用于处理 RNase-Free的水。充分降解组织或细胞中蛋白质分子，以达到释放和萃取高质量核酸的辅助试剂。用于质粒或基因组DNA、RNA的分离以及蛋白多肽印迹实验。

值得注意的是，蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果.

白酶K的使用方法

孵育温度为5565℃，理想孵育温度为58℃；孵育时间为15分钟48小时，理想孵育时间为2小时。

蛋白酶K的配制

20mg/ml蛋白酶K配制标准(proteinase K)：将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直蛋白酶K*溶解。不要涡旋混合，加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

蛋白酶K的保存

保存在-20℃冰箱里，避免反复冻融，有效期为12个月。