转印缓冲液提供了电极之间的电连续性，其必须是导电的。它还提供了一个化学环境，能维持蛋白质的溶解度，又不妨碍转移过程中蛋白质吸附到膜上。

传统的转印缓冲液包含缓冲系统和甲醇。Tris甘氨酸缓冲液，常用于槽转印系统中。这种缓冲液的pH值为8.3，比大多数蛋白的等电点（pI）要高。在凝胶上分离的蛋白质带负电荷，向阳极迁移。由于槽内的缓冲液是混合的，故转移过程中的离子分布保持相对恒定。

在蛋白测序应用中，建议使用10 mM CAPS缓冲液（pH=11）。凝胶电泳缓冲液中残留的甘氨酸导致蛋白测序过程中出现高背景。通过改变转印缓冲液的配方，这种假象明显减少。

CAPS转移缓冲液适用于Western Blot实验中把蛋白质转移到PVDF膜或硝酸纤维素(NC)膜上，以便进行抗体的孵育和下游实验。 CAPS转移缓冲液(高分子量)主要由CAPS、DTT、甲醇等组成，缓冲范围pH9.7-11.1。适用于大分子量蛋白质(＞61KD)转移到PVDF膜或硝酸纤维素膜，效果优于普通的Western转移缓冲液，直接使用

转印缓冲液甲醇的功能

添加到转印缓冲液中的甲醇有两个主要功能：

• 稳定凝胶的尺寸。
• 从蛋白质分子上解离出复合的SDS。

聚丙烯酰胺是一种水凝胶，具有吸收水分的能力。在纯水中，各个维度的凝胶尺寸都有相当量的增加。溶胀度也取决于凝胶中所使用的丙烯酰胺的浓度。高浓度的凝胶比低浓度的凝胶溶胀得更多。梯度胶会明显突出这种影响，其底部高浓度的区域比顶部溶胀得更多。开始时是矩形的凝胶可能会变成梯形。添加到转印缓冲液中的甲醇能大限度地减少凝胶溶胀，当甲醇浓度为10%-20%时，尺寸稳定性可相当快速地实现。当甲醇浓度较低时，平衡需要更长的时间才能实现。如果在转移过程中发生尺寸改变，蛋白质的分辨可能会损失。

甲醇可帮助从蛋白质分子上解离所复合的SDS。尽管SDS对凝胶上单个蛋白质的分辨很必要，但是对于有效印迹却是极为不利的。先，SDS的结合给蛋白质分子带来高的负电荷密度，导致蛋白质分子非常快速地穿过膜，减少在孔结构内的停留，从而降低分子间相互作用的机会。其次，通过包被蛋白质分子，SDS限制蛋白质与PVDF进行分子接触的能力。这些影响随着蛋白质的分子量降低而增加。甲醇通过解离SDS，并提高蛋白质分子与膜结合的可能性，从而减少这两方面的影响。

转膜洗涤液

TBS缓冲液是生物学中常使用的等渗缓冲盐溶液，主要用于免疫组化和原位杂交，酶联免疫等实验中，清洗免疫印迹实验中非特异性结合的抗体等。由 Tris-HCl 构成稳定的PH缓冲体系，NaCl 提供等渗条件。本产品为 20×浓缩液，稀释后使用。组分浓度 Tris 200 mM NaCl 3 M PH 7.5-7.6使用时稀释成 1×，可加入 0.05% Tween-20，用于免疫印迹膜清洗。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

TBST 即在TBS中加入吐温20，吐温-20，浓度为0.5%-1.0%，增大浓度可以减小背景，同时更容易洗下结合不牢固的蛋白。