左氧氟沙星酶联试剂盒实验方法

7 工作液准备

7.1 左氧氟沙星（LT）标准品溶液：0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb

7.2 浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20（1+19）稀释备用

7.3 样本稀释液：用蒸馏水按1:10（1+9）稀释备用

7.3 显色剂：已备用，避免光线直照

7.4 反应终止液：已备用

8 样品处理程序（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存）

8.1取10g粉碎的样品，加 20ml 70%甲醇溶液

8.2强力振荡3分钟

8.3用 滤纸过滤

8.4取25μl处理后的样品，加入25μl样本稀释液于反应孔中（样本稀释倍数为2）

9 酶免分析步骤

9.1 实验须知

9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复室温（25±2℃），时间约2小时。回温室温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存

注：一定保证回温充分，否则影响检测的度和准确度。

9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存

9.1.3 请不要改变分析程序

9.1.4 请使用的微量移液器

9.1.5 操作一旦开始，请不要中断任何程序

9.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作

9.1.7 为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样

9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面

9.2 分析步骤

9.2.1 预行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测

9.2.2 取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存

9.2.3 样品稀释液（10×）、浓缩洗涤液（20×）稀释成工作液（蒸馏水或去离子水稀释）

9.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml标准品溶液

9.2.5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液

9.2.6 在各样品孔中加入50μl样品溶液

9.2.7 在所有孔中加入50μl的左氧氟沙星（LT）抗体酶结合物

9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。

9.3 37℃温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）

9.3.1 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液体。

9.4 反应

9.4.1 洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl显色液A，再加 50μl显色液B；轻微晃动反应板使之*混匀

9.4.2 37℃温浴10min

9.4.3 每孔中加入50μl终止液，混匀

9.4.4 在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。

10 结果计算

10.1定量分析

10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以*个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B0—0μg/L标准溶液的平均吸光度值

10.1.2 以左氧氟沙星（LT）浓度的对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为左氧氟沙星（LT）________浓度的对数值，求得反对数即为测定液中左氧氟沙星（LT）浓度C（ppb）

10.1.3由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。

10.2 半定量测定

10.1.1目测半定量测定：先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品吸光度值的高低比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

10.1.2仪器半定量测定：先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品颜色深浅比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

11 特异性

物质 交叉反应

左氧氟沙星（LT） 100%

12 试剂盒参数

本试剂盒检测下限为0.05ppb

B0吸光度佳值应大于1.0

试剂盒吸光度板内误差小于8％，板间误差小于15％。

用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80％。

13试剂盒提供的标准曲线范围为0.1ppb~8.1ppb。

14 分析限制

本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。