人肿瘤坏死因子

人肿瘤坏死因子操作步骤：

1．取出酶标板，设空白孔，依照次序对应分别加入100μl的标准品于空白微孔中（空白孔视为0号标准品，用医用蒸馏水替代）

2、分别标记样品编号，加入100μl的稀释样品于空白微孔中（不同的样本采用不同的吸头）。

3、将酶标板置于37℃温育30分钟；

4、将酶标板板取出，将其中的液体甩去，每个孔中全部加满应用洗涤液后，立即甩去液体;

5、每个孔中加满应用洗涤液后，轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去，在吸水纸上将酶标板拍干。

6、重复第5个步骤5次，在吸水纸上将酶标板拍干。

7、在标准品孔和样品孔中加入100μl的酶标偶合溶液。

8、将96孔板置于37℃温育30分钟。

9、将酶标板取出，将其中的液体甩去，每个孔中全部加满应用洗涤液后，立即甩去液体。

10、每个孔中再次加满洗涤应用液后，室温轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去，在吸水纸上将酶标板拍干。

11、重复第5个步骤5次，在吸水纸上将酶标板拍干。

12、在每个孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。轻轻振荡混匀。（A液、B液采用不同的吸头加样）

13、将酶标板置于37℃避光温育反应15分钟。

14、每个微孔中加入50μl的终止液，轻轻振荡混匀。

15、在酶标仪上，450nm处测定OD; 显色后，15分钟内进行测定。

16、根据制备的标准曲线，计算样本含量

人肿瘤坏死因子结果判断

1. 仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值；

2、检测值范围：0－800pg/ml

3、敏感度：1.0pg/ml

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