R2220 柱式法提取细胞组织miRNA试剂盒 说明书仅供参考

索莱宝生产的组织细胞miRNA提取试剂盒是专门针对miRNA提取而开发的新一代产品，其优势是无毒、无害，此外用该试剂盒提取的小RNA（SmallRNA）中，长度在15～200nt范围的RNA在95%以上，基本不含有大RNA和DNA。该试剂盒中的裂解液是经过长时间研发改良的，具有更强的的裂解能力和更高的提取灵敏度，试剂盒中的吸附柱采用特殊的硅基质膜填料，大大增强了其对RNA的吸附能力，尤其是smallRNA（<200nt）。得到的RNA纯度更好，质量更高。提取简单快速，整个过程30min左右即可完成，纯度好，得率高，可以直接用于各种下游实验。
产品特色：
1.完-全无毒，无需酚氯仿等有机试剂抽提。
2.适用范围广，可用于多种样品miRNA及总RNA的抽提纯化。
3.操作简单快速，整个过程30min左右完成。
4.纯度好，得率高，可以直接用于各种下游实验。
操作步骤：
一、动物组织样本提取
1.在液氮条件下充分将组织研磨粉碎，称取一定的样品量（10mg~35mg）于1.5mLEP管中，加入500μL裂解液，吸打混匀至组织粉末彻-底溶解于裂解液中。室温静置5min以充分裂解细胞。
2.向上述裂解完毕的裂解液中加入230μLBufferB，吸打混合均匀。4℃，13000rpm离心5min。
3.吸取600μL上清液，转移到新的1.5mLEP管中。向上述溶液中加入300μL无水乙醇，震荡混匀，室温放置5min。
4.将上述液体转移至miRNA吸附柱，4℃，12000rpm离心1min，收集滤液。
5.收集800μL滤液至1.5mL新EP管中，加入300μL异丙醇，震荡混匀。
6.分两次将上述液体转移至新的miRNA吸附柱。12000rpm，4℃离心1min，弃滤液。
7.向吸附柱中加入700μL漂洗液洗涤一次，4℃，12000rpm离心1min，弃滤液。
8.向吸附柱中加入500μL无水乙醇洗涤一次，4℃，12000rpm离心1min，弃滤液。
9.吸附柱4℃，12000rpm空离心2min，去掉残留的乙醇。
10.将吸附柱放入到新1.5mLEP管中，室温放置2min，使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入30μL洗脱液，室温静置2min。吸附柱4℃，12000rpm离心2min，洗脱产物即为提取的miRNA。
二、细胞样本提取
1.贴壁细胞：胰酶消化细胞后，离心收集细胞，用100μL1×PBS重悬细胞后，加入500μL裂解液，吸打混匀至细胞彻-底溶解于裂解液中。室温静置5min以充分裂解细胞。
2.悬浮细胞：直接离心后，收集细胞沉淀，加入500μL裂解液，吸打混匀至细胞彻-底溶解于裂解液中。室温静置5min以充分裂解细胞。
3.向上述裂解完毕的裂解液中加入250μLBufferB，吸打混合均匀。4℃，13000rpm离心5min。
4.吸取700μL上清液，转移到新的1.5mLEP管中。向上述溶液中加入300μL无水乙醇，震荡混匀，室温放置5min。
5.将上述液体转移至miRNA吸附柱A1。4℃，12000rpm离心1min，收集滤液。
6.收集950μL滤液至1.5mL新EP管中，加入400μL异丙醇，震荡混匀。
7.分两次将上述液体转移至miRNA吸附柱A2。4℃，12000rpm离心1min，弃滤液。
8.向吸附柱中加入700μL漂洗液洗涤一次。4℃，12000rpm离心1min，弃滤液。
9.向吸附柱中加入500μL无水乙醇洗涤一次。4℃，12000rpm离心1min，弃滤液。
10.吸附柱4℃，12000rpm空离心2min，去掉残留的乙醇。
11.将吸附柱放入到新1.5mLEP管中，室温放置2min，使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入30μL洗脱液，室温静置2min。吸附柱4℃，12000rpm离心2min，洗脱产物即为提取的miRNA。