流式细胞仪和细胞内细胞因子染色

流式细胞仪和细胞内细胞因子染色
无红细胞的单细胞悬浮液制备的脾细胞，刀豆蛋白A爆炸或PBL在FACS缓冲液（PBS中，用1％牛血清白蛋白和0.05％NaN的3）和细胞进行染色，在黑暗中在冰上20分钟，进行表面的表达CD8α（ APC-CY7），CD4（PerCP CY5.5），CD3ε（FITC），CD137（FITC），CD19（PerCP-Cy5.5标记），或NK1.1（PE-CY7所有的抗体，BD生物科学，圣地亚哥， CA）。细胞内染色，细胞透性使用的Cytofix / Cytoperm试剂盒，根据生产商的方案，和细胞内细胞因子使用肿瘤坏死因子-α，肿瘤坏死因子-α或IFN-γ（PR-700，BD生物科学）。四聚体分析，进行温育的细胞悬浮液与H2-K b / TRP-2的180-188四聚体（SVYDFFVWL，APC-标记，Sanquin，）或H2-K b / OVA 257-264四聚体，实物礼品CM 25分钟，在37°C和5％CO 2之前，随后的表面抗体染色。表面MHC-I类检测是由孵化IFN-γ引物和未曝光B16.F10细胞与小鼠抗鼠MHC I类抗体，圣迭戈，随后孵育检测的山羊抗小鼠IgG2a抗体，测量样品在FACS广东II流式细胞仪（Beckton Dickinson公司，圣迭戈，CA）。使用FlowJo软件的数据进行了分析。