5-羟色胺（5-HT）ELISA试剂盒说明书

发布时间：2013/1/21

点击次数：923

5-羟色胺（5-HT）ELISA试剂盒说明书
检测方法：比色
特异性:酶联免疫吸附测定试剂盒不显示交叉反应性，与任何细胞因子。
原则:犬的5 - 羟色胺（5HT）的酶联免疫吸附测定试剂盒是一种体外酶联免疫吸附试验犬5 - 羟色胺（5HT），血清，血浆，组织，细胞培养上清液和尿液的定量测量。犬的5 - 羟色胺（5HT）的多克隆抗体的预涂到96孔板中。标准和样品吸入的井及犬5 - 羟色胺（5HT）的样品中存在的由固定化的抗体与孔结合的。生物素化的抗体检测方法，加入到孔中，然后接着用PBS或TBS缓冲液洗涤。在洗去未结合的生物素化抗体，亲和素 - 过氧化物酶复合物被移液到各孔中。再次洗涤井，TMB底物溶液加入到各孔中和后，加入酸性停止溶液的颜色变化。夏季风犬5 - 羟色胺（5HT）的绑定，并且在450nm处测量的量是成比例的+ / - 10nm的。
试剂准备:
A）标准：标准溶液的制备应在实验前准备不超过2小时。到一个试管中，加入1毫升样品稀释缓冲液溶解的标准*倍稀释。
B）制备的生物素化的抗犬96T。
2。标准：96测试（2瓶）
3。应在1:99稀释检测抗体犬5 -羟色胺（5-HT）抗体的抗体稀释缓冲液充分混合，
C）制备亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）工作的解决方案：解决方案应该准备不超过实验前1小时
。的总体积应为：0.1ml/well×（孔数）。（允许超过总体积的0.1〜0.2毫升）
。亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）应在1:99稀释的ABC稀释液充分混合。
ð）制备的TMB工作的解决方案：转移9倍体积的TMB色剂A在1体积的TMB色发展中国家试剂B为30分钟，在37℃下，在使用前使TMB底物中，充分搅拌。
检测步骤:用户应确定样品稀释倍数粗略的估计犬5 -羟色胺（5-HT）的样本量。
1。等分0.1毫升每孔的的等级犬5 -羟色胺（5HT）的标准溶液到预涂的96孔板中。添加到控制以及样品稀释液0.1ml的缓冲。将0.1ml的血清，血浆，体液，组织裂解物或细胞培养上清液中的每个适当稀释的样品添加到每个空。
2。密封板与盖和在37℃下孵育90分钟。
3。取下盖子，舍弃板的内容，涂抹到纸巾或其它吸水材料板。在任何时候不要让井*干涸，洗涤两次。
4。向每个孔中加入0.1ml的生物素化的抗犬的5 -羟色胺（5HT）的抗体工作液孵育该板在37℃下60分钟。
5。三次用0.01M TBS或0.01M PBS洗板，每一次让清洗缓冲液留在孔中，持续1分钟。
6。导入各孔中，并加入0.1ml的制备ABC工作液，在37℃下孵育板30分钟。
7。将板洗涤5次，用0.01M TBS或0.01M PBS，并每次让留在井清洗缓冲液为1-2分钟。
8。0.09毫升的准备TMB显色剂添加到每口井，并培育板在37°Ç距离，观察颜色时，任何时候都可以看到深浅不一的蓝，在井的三四个集中的犬5 -羟色胺（5-HT）标准的解决方案。其他水井没有明显的颜色。每孔加入0.1ml的准备TMB的一站式解决方案。立即变成黄色的颜色变化。
9。阅读的OD在酶标仪在450nm处的吸光度，在30分钟之内加入停止溶液后，
10。可以绘制成每个标准溶液的相对OD 450（Y）对各自的标准溶液的浓度（X）的标准曲线。犬的5 -羟色胺（5HT）的样品的浓度可以从标准曲线内插。

文件下载

返回列表