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  • 6-酶磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒 (50T )
产品名称:

6-酶磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒 (50T )

产品品牌: SOLARBIO/索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2024-03-19
6-酶磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒 (50T )

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝

6-酶磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒 (50T )

产品简介 :
6-磷酸葡萄糖脱氢酶是磷酸戊糖途径的关键酶,催化 6-磷酸葡萄糖氧化为 6 -磷酸葡萄糖酸内酯,同时将 NADP 还原为 NADPH,以供生物合成及维持细胞内的还原状态,因此 6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。
G6PDH 能使 NADP 还原成 NADPH,6-磷酸葡萄糖 + NADP →6-磷酸葡萄糖酸内脂+NADPH;在一定
反应时间内其活性高低与反应前后生成物浓度的变化呈线性关系。本测试盒通过在 340 nm 下测定 NADPH增加速率来反应 G6PDH 活性的大小,NADPH 浓度升高越多则 G6PDH 活力越大。
试验中所需的仪器和试剂:
紫外可见分光光度计、37℃恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、蒸馏水
产品内容 :
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:储备液 50 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×2 支,-20℃保存;用时每只加 275µL 双蒸水充分溶解备用;
试剂三:粉剂×2 支,-20℃保存;用时每只加 275µL 双蒸水充分溶解备用。
操洽步骤 :
一 、 样品测定的准备 :
(1)  细菌 、 细胞或组织样品的制备 :
细菌或培养 细胞 :先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清,按照每 200 万细菌或细胞加入 400µL 提取
液的比例充分匀浆以破碎并裂解细胞。8000g 离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。
组织:称取 100mg 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。
(2 ) 血清 ( 浆 ) 样品 :直接检测。
二 、 测定操作表 :
测定管  对照管
试剂一(µL)  750  750
试剂二(µL)  10  10
试剂三(µL)  10  10
样本(µL)  30 
蒸馏水(µL)  30

将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中,加样本的同时开始计时,在 340 nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1,比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入 37℃或 25℃水浴中(哺乳动物用 37℃,非哺乳动物用 25℃),准确反应 5 分钟。迅速取出比色皿并擦干,340 nm 下比色,记录 5 分 20 秒时的吸光度 A2,
计算ΔA=A2-A1。
注意事项 :
1、若 A2-A1 大于 0.5,需将酶液用提取液稀释,使 A2-A1 小于 0.5,可提高检测灵敏度。
2、实验时,试剂二、试剂三和样本在冰上放置,以免变性和失活。试剂一 37℃或 25℃水浴放置。
3、比色皿中反应液的温度必须保持 37℃或 25℃,取小烧杯一只装入一定量的 37℃或 25℃蒸馏水,将此烧杯放入 37℃或 25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
4、好两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。
G6PDH  活?单位的计算 :
1 、 血清 ( 浆 )G6PDH  活力的计算:
单位定义:每升血清(浆)在反应体系中每分钟生成 1 µmol/L 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
G6PDH(U/L)= 857×(ΔA 测定管-ΔA 对照管)
2 、 组织中 G6PDH  活力的计算:
(1 ) 按样本蛋白浓度计算 :
单位定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成 1 nmol/L 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
G6PDH(U/mg prot)= 857×(ΔA 测定管-ΔA 对照管)÷蛋白质浓度(mg/mL)
(2 ) 按样本鲜重计算 :
单位定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成 1 nmol/L 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
G6PDH(U/g mass)=857×(ΔA 测定管-ΔA 对照管)÷样品鲜重(g/mL)
3 、 细菌或细胞中 G6PDH  活力的计算:
(1 ) 按样本蛋白浓度计算 :
单位定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成 1 nmol/L 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
G6PDH(U/mg prot)=857×(ΔA 测定管-ΔA 对照管)÷蛋白质浓度(mg/mL)
(2 ) 按细菌或细胞密度计算 :
单位定义:每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成 1 nmol/L 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
G6PDH(U/10 4 cell)=857×(ΔA 测定管-ΔA 对照管)÷细菌或细胞密度(10 4 个/mL)

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