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  • 大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)检测试剂盒
产品名称:

大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)检测试剂盒

产品品牌: 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2024-03-28
使用目的:
大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)检测试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)活性。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)水平。用纯化的大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入MMP-2,再与HRP标记的MMP-2抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体

产品概述

          大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)检测

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围:                                                          96T

6U/L -250 U/L

 

使用目的:

大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中基质金属蛋白酶-2(MMP-2活性

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2水平。用纯化的大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入MMP-2再与HRP标记的MMP-2抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的基质金属蛋白酶-2(MMP-2呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2活性浓度。 

试剂盒组成 

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1瓶

7

终止液

6ml×1瓶

2

酶标试剂

6ml×1瓶

8

标准品(480U/L

0.5ml×1瓶

3

标包被

12孔×8条

9

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

4

样品稀释液

6ml×1瓶

10

说明书

1份

5

显色剂A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2张  

6

显色剂B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1个

大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2标本要求 

  1. 血清:

室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

  1. 血浆:

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。

尿液:

用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4.细胞培养上清:

检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。

5.培养细胞:

检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

6.组织标本:

切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融

8.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

  1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

240 U/L

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

120 U/L

4号标准品

150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

60 U/L

3号标准品

150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

30 U/L

2号标准品

150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

15 U/L

1号标准品

150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

 

  1. 大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀
  2. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
  3. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
  4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  5. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 
  6. 温育:操作同3。
  7. 洗涤:操作同5。
  8. 大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
  9. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)
  10. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结:

 

 

计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 

注意事项

1.大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

  1. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。
  2. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8

2.有效期:6个月

 

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