基因组提取试剂盒真菌基因组DNA提取试剂盒

基因组提取试剂盒真菌基因组DNA提取试剂盒
货号：D2300
规格：50T、100T
保存：室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期 12 个月，2℃-8℃保存时间更长 。

产品说明：
    真菌是具有真核和细胞壁的异养生物。种属很多，已报道的属达 1 万以上，种超过 10 万个。真菌通常又分为三类，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌） 。对于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠处理，而对于大型真菌，可直接用液氮研磨。经过前期处理的菌液，用硅质膜吸附，即可得到高纯度的基因组。提取纯化后的 DNA，可以直接用于 PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游应用实验。

操作步骤：
    使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、样品的处理：
    1）对于酵母菌，取 1-2ml 培养好的菌液，离心收集，弃上清。加入 200ul 溶液 A，加入 20ul RNase A，再加入 100mg 玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约 5-10min。
    2）霉菌(孢子也可相同处理)：取 50-100mg 菌丝，加 200ul 溶液 A，用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝，加入 20ul RNase A，再加入 100mg 玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约 30min。
    3）大型真菌（如蘑菇等） ：称取 50-100mg 样品，倒入适量的液氮，立即研磨重复 3 次，使样品研成粉末（如无液氮， 可加 200ul 溶液 A 后用玻璃研磨器适当研磨） ， 加 200ul 溶液 A， 加入 20ul RNase A， 再加入 100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约 5min。
2、 加入 20ul 10mg/ml 的蛋白酶 K， 充分混匀， 55℃水浴消化， 30min。 消化期间可颠倒离心管混匀数次， 12000rpm离心 2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀，可再次离心。
3、在上清中加入 200ul 溶液 B，充分混匀。如出现白色沉淀，可放 55℃水浴 5min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不*，可能导致提取的 DNA 量少及不纯，还有可能导致上柱后堵柱子，请增加消化时间。
4、再加入 200ul 无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA 的提取，将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，放置 2 分钟。
5、12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入 500ul 漂洗液，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm 离心 2min，将吸附柱置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。
9、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm 离心 1min。
10、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置 2min，12000rpm 离心 2min，即可得到高质量的基因组DNA。

注意事项:

1. 由于真菌种类万千，对于一些特别难处理的真菌，可用液氮研磨，再用玻璃珠振荡，蛋白酶K处理，一般都可以得到一定量的基因组DNA，如电泳检测很弱，一般PCR都会有较好结果。
2. 若溶液A或溶液B中有沉淀，可在 55℃水浴中重新溶解。
3. 如果DNA提取量很少，可加长玻璃珠处理时间，如果提取DNA成弥散短条带，可减少玻璃珠处理时间。
4. 洗脱缓冲液的体积好不少于 50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在 8.0 左右(可用NaOH将水的pH值调此范围)，pH值低于 7.0 会降低洗脱效率；DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
5. DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD 260 处有显著吸收峰，OD 260 值为 1 相当于大约 50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。OD 260/ OD 280 比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
6. 在确保样品无误的情况下，如经过多次试验，都无法提出DNA，请将部分样品寄我公司，我们代为摸索优化条件，以使您的实验能够正常进行下去。

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