双缩脲法蛋白含量测定试剂盒 微量法

双缩脲法蛋白含量检测试剂盒说明书
微量法
货号: BC3185
规格: 100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：
提取液：自备。根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水。
产品说明：
样本可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
强碱性溶液中，双缩脲与CuSO₄形成紫色络合物；紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。该方法适用于蛋白质浓度高的样本，尤其是动物材料。
技术指标：
低检出限：0.1718 mg/mL
线性范围：0.25-12 mg/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、离心机、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、液体样本：澄清无色液体样本可以直接测定。
2、组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。（动物样本常常需要稀释）
3、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到540nm，蒸馏水调零。

2. 空白管：取0.5mL EP管，加入40μL蒸馏水，200μL试剂一，混匀后室温静置15min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，记为A空白管。

3. 标准管：取0.5mL EP管，加入40μL标准液，200μL试剂一，混匀后室温静置15min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，记为A标准管。

4. 测定管：取0.5mL EP管，加入40μL待测液，200μL试剂一，混匀后室温静置15min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，记为A测定管。

注意：空白管和标准管只需测定1-2次。

注意事项：

1. 样本蛋白浓度须在0.25~12mg/mL范围内，低于0.25mg/mL不能用此法，高于12mg/mL须做相应稀释。因此测定前用1~2个样做预实验，确保蛋白浓度在0.25~12mg/mL范围内。

2. 如果吸光值大于0.44，则需要将样本用蒸馏水稀释后再测定。

3. 待测样本蛋白提取可用生理盐水、双蒸水或不含蛋白的PBS提取。该法受硫酸铵、Tris缓冲液干扰，提取液中应不含这些物质；否则改用BCA蛋白质含量测定试剂盒。

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