北京索莱宝供应生化试剂CAS号121714-22-5 Fluo-3, AM（钙离子探针）

Fluo-3, AM
货号：S21010
保存：-20℃干燥避光保存，有效期一年。
产品说明：
CAS ：121714-22-5
中文名：钙荧光探针 Fluo-3, AM
英文名：1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthe nyl)phenoxy]-2-(2-
amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tet raacetic acid, pentaac etoxymethyl ester
结构式：
分子式：C 51 H 50 C l2 N 2 O 23
分子量：1129.85
性质：
1. 外观：红色粉末
2. 纯度：≥90% （HPLC）
3. 产品描述：
Fluo-3, AM 是常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切
形成 Fluo-3 ，从而被滞留在细胞内，Fluo-3 若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与细胞内
钙离子结合后可以产生较强的荧光，大激发波长为 506nm ，大发射波长为 526nm 。实际检测时推荐使用
的激发波长为 488nm 左右，发射波长为 525～530nm 。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内
钙离子浓度的变化。
： 操作说明： （for Human T cells）
1 ，试剂
2 mM 的 Fluo-3, AM/DMSO （将 1mg Fluo-3, AM 溶于 442µL DMSO ）
Pluronic F127
Hanks balanced salt solution（HBSS）
HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na 2 HPO 4 ，137mM NaCl，5mM KCl， 1mM CaCl 2 ， 0.5mM
MgCl 2 ，5mM Glucose，0.1% BSA，pH 7.4 ）
2 ，操作
（1） 向 Fluo-3, AM/DMSO 溶液中加入 16.5mg Pluronic F127， Pluronic F127 可以防止 Fluo-3, AM 在 HBSS 中
聚合并能帮助其进入细胞。
（2） 用 HBSS 稀释 Fluo-3, AM 溶液，制备 4µM 的 Fluo-3, AM 工作液。
（3） 将 Fluo-3, AM 工作液加入细胞，在 37℃培养 20 分钟。
（4） 加入 5 倍体积的含有 1%胎牛血清的 HBSS，再继续培养 40 分钟。
（5） 用HEPES buffer saline洗涤细胞 3 次，然后用HEPES buffer saline使细胞重悬浮，制成 1×10 5  cells/mL 的
溶液。
（6） 37 ℃下培养 10 分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长 506nm，发射波长 526nm 。
注意：标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定适宜条件。以上方法仅供参考。