琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒 微量法

产品名称:：  琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒 微量法

产品英文名: Micro Succinate Dehydrogenase(SDH) Assay Kit

产品货号：BC0955                产地：北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格：100管/96样            产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：900.00元
库存状态：现货                          
关键字:：    琥珀酸脱氢酶检测试剂盒|SDH检测试剂盒| 琥珀酸脱氢酶|试剂盒

简要介绍：
SDH（EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH 是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。
    SDH 催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯fen靛酚（DCPIP），并且在600nm 处具有特征吸收峰，通过600nm 吸光度的变化，测定2．6-DPIP 的还原速度，代表SDH 酶活性。

产品详细描述
产品内容：
试剂一：液体110mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体1mL×1瓶，-20℃保存；
试剂三：液体18mL×1瓶，4℃保存；
试剂四：粉剂×1支，4℃保存；临用前加入到试剂三中溶解待用；
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入4mL双蒸水，用不完的试剂仍4℃保存；
试剂六：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入3.333mL双蒸水，用不完的试剂4℃保存。
产品说明：
 SDH（EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。
SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯fen靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的变化，测定2．6-DPIP的还原速度，代表SDH酶活性。

试验所需自备仪器和样品：
 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、SDH的提取
准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4 ℃ 11000 g离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤和加样表

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长600nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定

将试剂三和试剂五依次加入到1.5mLEP管中，37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）保温10min后加入到微量比色皿或96孔板再按表格依次加入各试剂，在600 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和1分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2，得到ΔA测定，ΔA空白。
三、SDH活性的计算
a.用微量比色皿测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯fen靛酚定义为一个酶活性单位。
SDH活性（U/mg prot）＝[（ΔA测定-ΔA空白）÷（ε×d）×V反总×10⁹]÷(Cpr×V样) ÷T
    ＝952.381×（ΔA测定-ΔA空白）÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯fen靛酚定义为一个酶活性单位。
SDH活性（U/g 鲜重）＝[（ΔA测定-ΔA空白）÷（ε×d）×V反总×10⁹]÷(V样÷V样总×W) ÷T
                     ＝961.905×（ΔA测定-ΔA空白）÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯fen靛酚定义为一个酶活性单位。
SDH活性（U/10⁴ cell）＝[（ΔA测定-ΔA空白）÷(ε×d)×V反总×10⁹]÷(V样÷V样总×500) ÷T
                     ＝1.924×（ΔA测定-ΔA空白）
    V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×10⁴L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入试剂一和试剂二体积，1.01 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯fen靛酚定义为一个酶活性单位。
 SDH活性（U/mg prot）＝[（ΔA测定-ΔA空白）÷（ε×d）×V反总×10⁹]÷(Cpr×V样) ÷T
＝1587.302×（ΔA测定-ΔA空白）÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯fen靛酚定义为一个酶活性单位。
SDH活性（U/g 鲜重）＝[（ΔA测定-ΔA空白）÷（ε×d）×V反总×10⁹]÷(V样÷V样总×W) ÷T
                     ＝1603.175×（ΔA测定-ΔA空白）÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯fen靛酚定义为一个酶活性单位。
SDH活性（U/10⁴ cell）＝[（ΔA测定-ΔA空白）÷(ε×d)×V反总×10⁹]÷(V样÷V样总×500)÷T
                     ＝3.206×（ΔA测定-ΔA空白）
    V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×10⁴L/mol/cm；d：96孔板光径，0.6cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入试剂一和试剂二体积，1.01mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
注意事项：
1、测定过程中所有试剂和样本在冰上放置，以免变性失活。
2、若ΔA大于0.5（比色皿）/0.3（96孔板），需将酶液用酶提取液稀释，使ΔA小于0.5/0.3，可提高检测灵敏度。

相关文献：
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影响因子:5.657 PMID:31022448

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