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  • 琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒 微量法
产品名称:

琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒 微量法

产品品牌: 索莱宝 价格: 520
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-09
琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒 微量法
测定意义:SDH(EC 1.3.5.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶,位于线粒体内膜上的一种膜结合酶,是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外,为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC0955
规格100管/96样供货周期现货
主要用途琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒 微量法

产品名称:  琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒 微量法

产品英文名: Micro Succinate Dehydrogenase(SDH) Assay Kit

产品货号:BC0955                产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格:100管/96样            产品商标:solarbio
保存与运输:4℃保存或-20℃保存;            参考价格:900.00元
库存状态:现货                          
关键字:    琥珀酸脱氢酶检测试剂盒|SDH检测试剂盒| 琥珀酸脱氢酶|试剂盒

简要介绍:
SDH(EC 1.3.5.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH 是线粒体的一种标志酶,位于线粒体内膜上的一种膜结合酶,是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外,为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。
    SDH 催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸(PMS)传递还原2,6-二氯fen靛酚(DCPIP),并且在600nm 处具有特征吸收峰,通过600nm 吸光度的变化,测定2.6-DPIP 的还原速度,代表SDH 酶活性。


产品详细描述
产品内容
试剂一:液体110mL×1瓶,-20保存;
试剂二:液体1mL×1瓶,-20保存;
试剂三:液体18mL×1瓶,4保存;
试剂四:粉剂×1支,4保存;临用前加入到试剂三中溶解待用;
试剂五:粉剂×1瓶,4保存;临用前加入4mL双蒸水,用不完的试剂仍4℃保存;
试剂六:粉剂×1瓶,-20保存;临用前加入3.333mL双蒸水,用不完的试剂4℃保存。
产品说明
 SDHEC 1.3.5.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶,位于线粒体内膜上的一种膜结合酶,是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外,为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。
SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸(PMS)传递还原2,6-二氯fen靛酚(DCPIP),并且在600nm处具有特征吸收峰,通过600nm吸光度的变化,测定26-DPIP的还原速度,代表SDH酶活性。

试验所需自备仪器和样品
 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、SDH的提取
准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂二,用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨,4  11000 g离心10min,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤和加样表

  1. 分光光度计预热30min以上,调节波长600nm,蒸馏水调零。
  2. 样本测定
试剂名称(μL测定管空白管
试剂三168168
试剂五1212
37(哺乳动物)25(其它物种)保温10min左右
样本10 
蒸馏水 10
试剂六1010

将试剂三和试剂五依次加入到1.5mLEP管中,37(哺乳动物)25(其它物种)保温10min后加入到微量比色皿或96孔板再按表格依次加入各试剂,在600 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1120秒时的吸光度A2,计算ΔA=A1-A2,得到ΔA测定,ΔA空白。
三、SDH活性的计算
a.用微量比色皿测定的计算公式如下
1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯fen靛酚定义为一个酶活性单位。
SDH活性(U/mg prot)=[ΔA测定-ΔA空白)÷ε×d×V反总×109]÷(Cpr×V) ÷T
    952.381×ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr
2)按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯fen靛酚定义为一个酶活性单位。
SDH活性(U/g 鲜重)=[ΔA测定-ΔA空白)÷ε×d×V反总×109]÷(V÷V样总×W) ÷T
                     961.905×ΔA测定-ΔA空白)÷W
3)按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯fen靛酚定义为一个酶活性单位。
SDH活性(U/104 cell)=[ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V÷V样总×500) ÷T
                     1.924×ΔA测定-ΔA空白)
    V反总:反应体系总体积,2×10-4 Lε2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×104L/mol/cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.01 mLV样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01 mLT:反应时间,1 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样品质量,g500:细菌或细胞总数,500万。
b.96孔板测定的计算公式如下
1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯fen靛酚定义为一个酶活性单位。
 SDH活性(U/mg prot)=[ΔA测定-ΔA空白)÷ε×d×V反总×109]÷(Cpr×V) ÷T
1587.302×ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr
2)按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯fen靛酚定义为一个酶活性单位。
SDH活性(U/g 鲜重)=[ΔA测定-ΔA空白)÷ε×d×V反总×109]÷(V÷V样总×W) ÷T
                     1603.175×ΔA测定-ΔA空白)÷W
3)按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯fen靛酚定义为一个酶活性单位。
SDH活性(U/104 cell)=[ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V÷V样总×500)÷T
                     3.206×ΔA测定-ΔA空白)
    V反总:反应体系总体积,2×10-4 Lε2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×104L/mol/cmd96孔板光径,0.6cmV样:加入样本体积,0.01 mLV样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01mLT:反应时间,1 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样品质量,g500:细菌或细胞总数,500万。
注意事项
1、测定过程中所有试剂和样本在冰上放置,以免变性失活。
2、若ΔA大于0.5(比色皿)/0.396孔板),需将酶液用酶提取液稀释,使ΔA小于0.5/0.3,可提高检测灵敏度。

相关文献:
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影响因子:5.657 PMID:31022448

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