蛋白质电泳试剂PAGE凝胶银染试剂盒

蛋白质电泳试剂PAGE凝胶银染试剂盒
货号: G7210
规格: 1L
保存: 室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期 12 个月。

注：1L 规格指可配制的硝酸银染色液的体积，实际使用次数根据 PAGE 胶大小不同而不同。
 

产品简介:
    核酸银染的原理是银离子可与核酸形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使 Ag+还原成银颗粒，可把核酸电泳带染成黑褐色。它主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色。其灵敏度比 EB 高 200 倍，该产品整个过程只需要 20 分钟，操作简单，灵敏度高，能检测到 10ng 以下的 DNA 条带。

    聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺在加速剂N，N，N，N—四甲基乙二胺(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(简称AP)或核黄素(即vitamin B2)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳
(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE)
    SDS－PAGE是在要电泳的样品中加入含有SDS和β-巯基乙醇(或者DTT)的样品处理液，SDS可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构，β-巯基乙醇可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质的四级结构。SDS还与蛋白质结合使蛋白质－SDS复合物上带有大量的负电荷，这时各种蛋白质分子本身的电荷*被SDS掩盖。这样电泳时，就消除了各种蛋白质本身电荷及结构上的差异，电泳速度只是与蛋白质分子量有关。用本法测定蛋白质的分子量只需根据待测蛋白质在已知分子量的标准蛋白质图中的位置，就能得知分子量。
 

操作步骤:
一、染色液配制
    需要配制的染色液体积根据 PAGE 胶的大小而定，一般的 mini-PAGE 胶需要 20-30mL。配制用的器皿清洗干净后用去离子水涮洗，染色液须用去离子水配制，现用现配。如果配制的溶液体积不是 100mL，可以按比例改变各成分用量。
    1，硝酸银染液：称取 0.2g 硝酸银，加入到 90ml 去离子水中*溶解，加入 10ml 溶液 A 混匀，现用现配。
    2，显色液：分别取溶液 B 和溶液 C 各 10ml 加入 80ml 去离子水中混匀，现用现配。
    3，终止液：取终止液 D 10ml 加去离子水稀释 100ml，现用现配。
二、染色：
    1，PAGE 电泳结束后，将 PAGE 蛋白胶转移玻璃平皿或搪瓷盘中，用去离子水漂洗两遍，每次 2min。
    2，将 PAGE 胶转移硝酸银染液中，使染液没过 PAGE 胶，室温染色 10min。可置于摇床上缓慢摇晃，使其染色均匀。
    3，弃去染色液，用去离子水快速漂洗三次，每次半分钟。
    4，将 PAGE 胶转移显色液中，使显色液没过 PAGE 胶，室温摇晃显色条带清晰可见。
    5，可选，将 PAGE 胶转移终止液中，终止显色 1min。
    6，银染后 PAGE 胶可拍照保存或用于后续试验。
 

注意事项 ：
    1.  银染主要出现在 PAGE 胶的表面，使用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。
    2.  对于考马斯亮蓝染色的 SDS-PAGE 胶，可用甲醇将胶漂洗后，继续进行银染。考染过程中的乙酸会干扰银染，因此要确保将 PAGE 凝胶中残留的乙酸*洗净。
    3.  不同蛋白质对银染的反应是不一样的，尤其是碱性蛋白染色效果差。因此，不宜用银染测定不同蛋白的比例。
    4.  染色过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择 40-60 rpm.
    5.  凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致，所以全程中都应带手套操作。
    6.  PAGE 凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的，所以溶液的配制应使用电导率小于 1 µS 的去离子水。
    7.  如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面，可能是在几步漂洗过程中洗得不够*，或是染色过程时温度太低。
    8.  较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。
    9.  PAGE 胶中的甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100 和两性电解质这些物质会干扰银染。
   10. 室温操作时，温度的波动往往会干扰银染的效果，恒温水浴可以解决这个问题。
   11. 凭借戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染色提高 40 倍。
   12. 染色使用的玻璃器皿必须非常干净，用酸浸泡可以满足要求。
   13. 银染应尽快照相，随着时间延长，蛋白条带会变浅，而背景会加深。
   14. 银染容器理想的是玻璃平皿，其次是搪瓷盘和密胺塑料盘等。

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