蛋白定量试剂Bradford蛋白浓度测定试剂盒

蛋白定量试剂Bradford蛋白浓度测定试剂盒
货号：PC0010
规格：2500T
保存：开封使用后请密封保存，本试剂盒自订购之日起九个月内有效。

产品内容：

产品简介：
    考马斯亮兰 G-250 染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的大吸收峰的位置（Imax），由 465nm 变为 595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值 A595 与蛋白质浓度成正比。Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达 1M，二硫苏糖醇的浓度可高达 5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保 SDS 的浓度低于 0.1%，Triton X-100 低于 0.1%，Tween 20, 60, 80 低于 0.06%。
    含去垢剂的样品推荐使用索莱宝生产的 BCA 蛋白浓度测定试剂盒。

操作说明：
一．微孔酶标仪法
    1.  *溶解蛋白标准品，取 10ul，稀释 250ul ，使终浓度为 0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用 0.9%NaCl 或 PBS 稀释标准品。
    2.  5×G250 染色液使用前请颠倒 3-5 次混匀， 取 1ml 5×G250 染色液， 加入 4ml 双蒸水， 混匀成 1×G250染色液，此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。
    3.  将标准品按 0,2,4,6,8,12,16,20 微升分别加到 96 孔板中，加 PBS 稀释液补足到 20 微升。
    4.  将样品作适当稀释（好多做几个梯度，如作 2 倍、4 倍、8 倍稀释），加 20 微升到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2 后。
    5.  各孔加入 200 微升稀释后的 1×G250 染色液，室温放置 3-5 分钟。
    6.  用酶标仪测定 A595，或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。
    7.  根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

二．分光光度计法
    如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。

步骤如下：
    1.  取八支（或者更多）干净的 10ml 离心管，标记上号。
    2.  取 100ulBSA 加入 PBS 2.4ml 稀释终浓度为 0.2mg/ml。
    3.  5×G250 染色液使用前请颠倒 3-5 次混匀，取 10ml 5×G250 染色液，加入 40ml 双蒸水，混匀成 1×G250 染色液，此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。
    4.  按下表加入试剂(以每孔 5ml 计，多余的用来清洗比色皿)

     5. 反应 3 分钟后测 OD 值。为了实验的准确性，可每间隔 2 分钟加一管染色液，每间隔 2 分钟测一管 OD值。如下表：

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参考文献：
《Cetuximab and Doxorubicin loaded dextran-coated Fe3O4 magnetic nanoparticles as novel targeted nanocarriers for non-small cell lung cancer》 作者:Qinlu Zhang，Qian Liu，Menghan Du，Yali Cui，Lixia Zhang，Lili Guo，Le Ma，Mingwei Chen， 期刊:Journal of Magnetism and Magnetic Materials 影响因子:3.046 PMID:

《The critical roles of exposed surface residues for the thermostability and halotolerance of a novel GH11 xylanase from the metagenomic library of a saline-alkaline soil》 作者:Zhongyuan，Li，Xiumei Li，Tianhui Liu，Shiheng Chen，Huihui Liu，Hui Wang，Kun Li，Yajian Song，Xuegang Luo，Junqi Zhao，Tongcun Zhang 期刊:International Journal of Biological Macromolecules 影响因子:4.784 PMID:30986455