蛋白定量试剂 BCA蛋白浓度测定试剂盒

蛋白定量试剂 BCA蛋白浓度测定试剂盒
货号 ：PC0020
规格 ：500 微孔(500T)
保质期 ：有效期 1 年。

产品内容 ：

产品简介 ：
    碱性条件下，蛋白将Cu 2+ 还原为 Cu + ， Cu + 与 BCA 试剂形成紫蓝色的络合物，测定其在 562nm 处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂 SDS，Triton X-100，Tween 不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。

操作说明 ：
一. 微孔酶标仪法
    1. 配制工作液：根据标准品和样品数量，按 50 体积 BCA 试剂加 1 体积 Cu 试剂（50:1）配制成 BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA 工作液室温 24 小时内稳定。
    2. 稀释标准品：取 10 微升 BSA 标准品用 PBS 稀释 100 微升（样品一般可用 PBS 稀释） ，使终浓度为 0.5mg/ml。将标准品按 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20 微升加到 96 孔板的蛋白标准品孔中，加 PBS 补足 20 微升。
    3. 将样品作适当稀释（好多做几个梯度，如作 2 倍、4 倍、8 倍稀释） ，加 20 微升到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量样品时误差偏大，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2 后。
    4. 各孔加入 200 微升 BCA 工作液，37℃放置 15-30 分钟。用酶标仪测定 A562nm，根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

二. 分光光度计法
   如没有酶标仪，可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。
步骤如下：
    1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量，按 50 体积 BCA 试剂加 1 体积 Cu 试剂（50:1）配制成 BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA 工作液室温 24 小时内稳定。
   2. 稀释标准品：取 100 微升 BSA 标准品用 PBS 稀释 1ml（样品一般可用 PBS 稀释） ，使终浓度为0.5mg/ml。
   3. 取八支（或者更多）5ml 离心管，标上号，按下表加入试剂。
    4. 37℃放置 15-30 分钟。用分光光度计测 562nm 处吸光值，根据标准曲线计算出蛋白浓度。

注意事项 ：
    1. 长期不用时，Cu 试剂与 PBS 稀释液可置于 2-8℃保存，如发现细菌污染则应丢弃。BCA 试剂在低温条件下出现结晶沉淀时，可 37℃温育使其*溶解, 不影响使用。
    2. 样品中若含有较多干扰物质时，请采用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。
    3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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参考文献：
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