蛋白质电泳试剂1×Tris-tricine-SDS-PAGE电泳缓冲液（阳极+）

蛋白质电泳试剂1×Tris-tricine-SDS-PAGE电泳缓冲液（阳极+）
货号：T1225
规格：500ml

产品简介 ：
    常规的 Tris-SDS-PAGE 电泳的只能分辨大分子蛋白， 对于相对分子量小的， 尤其是 10 kD 以下的蛋白分辨率极低。而 Tricine-SDS-PAGE 可以很好的分离分子量在 1-10 kD 的蛋白及多肽，成为目前电泳法变性分离多肽的主要方法。本产品包括 Tricine-SDS- PAGE 凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量各种浓度的凝胶，方便、快捷，电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验。 

    聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺在加速剂N，N，N，N—四甲基乙二胺(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(简称AP)或核黄素(即vitamin B2)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳
(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE)

    SDS－PAGE是在要电泳的样品中加入含有SDS和β-巯基乙醇(或者DTT)的样品处理液，SDS可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构，β-巯基乙醇可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质的四级结构。SDS还与蛋白质结合使蛋白质－SDS复合物上带有大量的负电荷，这时各种蛋白质分子本身的电荷*被SDS掩盖。这样电泳时，就消除了各种蛋白质本身电荷及结构上的差异，电泳速度只是与蛋白质分子量有关。用本法测定蛋白质的分子量只需根据待测蛋白质在已知分子量的标准蛋白质图中的位置，就能得知分子量。

注意事项 ：
    1、 10%APS 配制后分装-20 度保存。 APS 溶液不稳定， 应尽量减少室温存放时间， 每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换，使用-20 度保存的 10%APS。
    2、在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
    3、在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。
    4、丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
    5、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

I 配制分离胶
    1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 6%C 、凝胶缓冲液和甘油加入到离心管中混合。
    2、加入 10%APS 和 TEMED，立即涡旋混匀 5-10 秒，以使溶液充分混匀。
    3、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液（1 mm mini-gel，分离胶溶液加约 4 ml ） ，然后在分离胶溶液上轻轻 覆盖一层 1-3 cm 的水层，使凝胶表面保持平整。
    4、静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
II  配制夹层胶
    去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。
    1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。
    2、加入 10%过硫酸铵和 TEMED，立即涡旋混匀 5-10 秒，以使溶液充分混匀。
    3、将适量的夹层胶溶液迅速加分离胶的上面（对于 1 mm 的 mini-gel，夹层胶溶液加约 1 ml ） ， 然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层水层，使凝胶表面保持平整。
    4、静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
III 配制浓缩胶去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
    1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。
    2、加入 10%过硫酸铵和 TEMED，立即涡旋混匀 5-10 秒，以使溶液充分混匀。
    3、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
    4、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
    5、进行电泳操作。

IV 电泳
   将电泳槽放入 4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液（T1225） ，内槽加入阴极缓冲液（T1215） ，30V 预电泳
   10min，将样品（已经过 Tricine 上样缓冲液 P1325 处理）加入点样孔后 30V 电泳 1 小时，100V 电泳溴酚
   蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。

常规SDS聚丙烯酰胺凝胶配制方法
试剂            分离胶8%   分离胶10%   分离胶12%   浓缩胶4%
配制量           10ml       10ml         10ml        5ml
30%丙烯酰胺      2.67ml     3.33ml       4.0ml      0.67ml
1.5mol/LTris(pH8.8)2.5ml    2.5ml        2.5ml      -
1.0mol/LTris(pH6.8) -       -            -           0.625ml
10%SDS           100ul      100ul        100ul       50ul
ddH2O             4.6ml      4.0ml       3.3ml      3.6ml
TEMED             10ul       10ul        10ul       5ul
10%过硫酸铵       100ul      100ul       100ul      50ul
注意：TEMED和10%过硫酸铵后加，在加入前需混匀前面所加试剂。10%过硫酸铵在4℃有效期为一周，TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。在常温下胶30分钟内可以凝固，如温度过低，可放37℃温箱凝固。灌完分离胶后，轻轻的加1mlddH 2 O封上层，胶凝固后可见到分界线。灌浓缩胶时，先倾去水层，再用吸纸吸干。灌浓缩胶后立刻插入梳子。浓缩胶凝固后，放入电泳液中(让电泳液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，可防加样孔变形。

蛋白质电泳试剂1×Tris-tricine-SDS-PAGE电泳缓冲液（阳极+）订购说明：

1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。 
2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。 
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日新价格为准。 
4、每日订单截止时间为16点整，部分城市可到17点整，因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后，将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。

蛋白质电泳试剂1×Tris-tricine-SDS-PAGE电泳缓冲液（阳极+）运输说明：

1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝的箱子，然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
2、低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
3、常温产品：常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货，准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。