线粒体呼吸链系列试剂盒 AMP含量试剂盒

线粒体呼吸链系列试剂盒 AMP含量试剂盒

产品简介 ：
    AMP 广泛存在于动物、 植物、微生物和培养细胞中， 是描述细胞能量代谢状态的主要参数。 测定 AMP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。
    AMP 在 254 nm 下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法测定其含量。

试验中所需的仪器和试剂：
    高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、针头式过滤器（水系，50 个，0.22µm） 、滤膜（水系和有机系各 1 个，0.45µm） 、C18 柱（4.6 ×150 mm） 、可调式移液器、样品瓶（50 个，2mL） 、甲醇（色谱级，300 mL） 、甲醇（色谱级，300 mL） 、蒸馏水

产品内容 ：
     试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
     试剂二：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
     试剂三： 粉剂 1×1 瓶， 粉剂 2×1 瓶， 4℃保存； 临用前用少量蒸馏水将粉剂 1 和粉剂 2 溶解后倒入 1000mL容量瓶中，用蒸馏水定容 1000mL，形成流动相缓冲液基质（注：试剂瓶中的粉剂要冲洗干净）, 4℃可保存 1 周；
     试剂四： AMP 标准品 5mg×1 支， -20℃保存。 临用前加入 1mL 双蒸水， 配成 5mg/mL 溶液， 配好后-20℃可保存 1 周；

操作步骤 ：
一 、 实验前的准备工作 ：
     1、将双蒸水 1000 mL、流动相缓冲液基质 1000 mL 和甲醇 300 mL 用 0.45 µm 的滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞色谱柱。（注：双蒸水和缓冲液基质用水系滤膜抽滤，甲醇用有机系滤膜抽滤）。
     2、 流动相的配制： 将抽滤完毕的流动相缓冲液基质 1000 mL 与甲醇配比为 99.9： 0.1 （v/v） ， 即取 999mL缓冲液基质与 1mL 甲醇混合。
     3、将抽滤完毕的甲醇和双蒸水配比成 100%的甲醇， 10%的甲醇，双蒸水各 250 mL。 将 2 和 3 中的溶剂超声 30 分钟，以脱去溶剂中的气泡，防止堵塞色谱柱。

二 、AMP  的提取 ：
     1、组织的处理：准确称取组织重量 0.1g，加入 1mL 试剂一，提取 AMP， 4000 g 常温离心 15 min，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000 g 常温离心 15 min，取上清，0.22µm 水系微孔滤膜过滤后冰上放置，待测。

     2、 细胞处理： 收集约 30 mL 细胞， 离心菌体经干燥后， 加入 1 mL 试剂一， 超声破壁细胞(950 W， 30%，15 min，工作 1 s 间隔 2 s)，4000 g 常温离心 15 min，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000 g 常温离心 15 min，取上清，0.22µm 水系微孔滤膜过滤后冰上放置，待测。

三 、AMP  含量测定操作步骤 ：
     1. 开启电脑、检测器和泵，安装上色谱柱，打开 empower 软件，在方法组中设置进样量 20 µL，流速 1mL/min，保留时间 10min，检测波长 254nm,设置完毕保存方法组。
     2. 用 100%的甲醇、10%的甲醇、双蒸水按甲醇浓度从大到小的顺序洗色谱柱 30min。
     3. 用流动相洗柱子，待基线稳定后开始加样。
     4. 加入标准品 20 µL，在 10min 内可分离 AMP，AMP 的保留时间在 7min 左右（柱子不同，保留时间有差异），计算不同浓度的 AMP 标准品的峰面积。
     5. 加入样品 20 µL，在相应保留时间处检测 AMP 的峰面积。
        AMP  含量的计算 ：将 5mg/ml 的 AMP 标准品用双蒸水分别稀释成 100 µg/ml、80 µg/ml、60 µg /ml、40 µg /ml 和 20 µg /ml的 AMP 标准品溶液，以标准品浓度（µg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标分别计算 AMP 标准曲线。
        注：标准品的稀释倍数要根据样品中 AMP 浓度确定，样品中 AMP 的峰面积必须落在不同浓度的 AMP 标准品的峰面积之内，该标准品稀释倍数只是一个参考。

线粒体呼吸链系列试剂盒 AMP含量试剂盒订购说明：

1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。 
2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。 
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日新价格为准。 
4、每日订单截止时间为16点整，部分城市可到17点整，因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后，将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。

运输说明：

1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝的箱子，然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
2、低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
3、常温产品：常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货，准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。