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产品名称:

酵母基因组DNA大量提取试剂盒

产品品牌: 索莱宝 价格: 1000
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-19
酵母基因组DNA大量提取试剂盒
本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取酵母基因组 DNA。离心吸附柱中 采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效专一吸附 DNA,可大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机 化合物。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号D1910
规格10T供货周期现货
主要用途酵母基因组DNA大量提取应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

酵母基因组DNA大量提取试剂盒

产品简介: 
本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取酵母基因组 DNA。离心吸附柱中 采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效专一吸附 DNA,可大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机 化合物。提取的基因组 DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组 DNA 可用于各种常规 操作,包括酶切、 PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。 

操作步骤: 
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在 室温下离心。 
1、在离心管中收集酵母细胞 20-40ml(不超过 109 ce l1 s),10000rpm 离心 1min,尽量吸除上清。 
2、酵母细胞壁的破除:向酵母菌体中加入 9ml 山梨醇 Buffer。充分悬浮菌体,加入 600ul 酵母破壁酶和 100ul 巯 基还原剂,充分混匀。30℃处理 1-2h,期间可颠倒离心管混匀数次。 
3、10000rpm 离心 lmin,弃上清,收集沉淀。 
4、向沉淀中加入 5ml 溶液 A,充分悬浮沉淀,向悬浮液中加入 500ul 的 RNase A(10mg/ml),充分颠倒混匀,室温 放置 10min。 
5、加入 500ul 的蛋白酶 K(10mg/ml),充分颠倒混匀。65℃水浴消化 30-60min,消化期间可颠倒离心管混匀数次, 直样品消化完全为止。 
6、加入 5ml 溶液 B,再加入 5ml 无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响 DNA 的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,室温放置 2min。 
7、10000rpm 离心 2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。 
8、向吸附柱中加入 7ml 漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。10000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱 放入收集管中。 
9、向吸附柱中加入 7ml 漂洗液, 10000rpm 离心 l min, 弃废液,将吸附柱放入收集管中。 
10、10000rpm 离心 2min,将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除, 否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR 等。 
11、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加 1-2ml 经 65℃水浴预热的洗脱液,室温放置 5min, 10000rpm 离心 l min。 
12、离心所得洗脱液再加入吸附柱中,10000rpm 离心 2 min,即可得到高质量的基因组 DNA。 

注意事项: 
1、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量下降。 
2、若试剂盒中的溶液出现沉淀,可在 65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响提取效果。 
3、如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况,可适当延长离心时间。 
4、洗脱缓冲液的体积不少于 1ml,体积过小会影响回收效率;洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影响,若需要 用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值调此范围), pH 值低于 7. 0 会降低洗脱效率。 DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。 
5、 DNA 浓度及纯度检测:得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。 回 收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在 OD260处有显著吸收峰,OD260 值为 1.0 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、40μg/ml 单链 DNA。OD260/0D280比值应为 1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗 脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。 

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《A rapid and efficient one-step site-directed deletion, insertion, and substitution mutagenesis protocol》 作者:Deguang Wu,Xuewu Guo,Jun Lu,Xi Sun,Feng Li,Yefu Chen,Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影响因子:2.275 PMID:23256925
《Enhanced freeze tolerance of baker’s yeast by overexpressed trehalose-6-phosphate synthase gene (TPS1) and deleted trehalase genes in frozen dough》 作者:Haigang Tan,Jian Dong,Guanglu Wang,Haiyan Xu,Cuiying Zhang,Dongguang Xiao 期刊:Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 影响因子:2.533 PMID:24951963
《A two-step integration method for seamless gene deletion in baker’s yeast》 作者:Jian Dong,Guanglu Wang,Cuiying Zhang,Haigang Tan,Xi Sun,Mingyue Wu,Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影响因子:2.275 PMID:23597844
 

酵母基因组DNA大量提取试剂盒

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