谷*酰胺酶(GLS)活性检测试剂盒 微量法

谷*酰胺酶（GLS）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1455
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 提取液：若试剂有结晶析出，可40℃加热或者超声溶解。

2. 试剂一：临用前加入5 mL提取液充分溶解待用；

3. 试剂二B：临用前将试剂二A倒入试剂二B中混匀（A:B=1：4比例），2-8℃保存4周；或者根据样本量，按照体积比试剂二A：试剂二B=1:4现配现用；

4. 标准品：10 μmol/mL 氮标准液。

5. 1.25μmol/mL标准溶液的制备：临用前取125μL 10μmol/mL氮标准液和875μL提取液混合得1.25μmol/mL的标准溶液备用。

产品说明：
谷*酰胺酶（L-glutamine amidohydrolase，EC3.5.1.2）主要存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷*酰胺水解成谷*酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
本试剂盒利用靛酚蓝比色法测定GLS催化谷*酰胺生成的氨来计算其酶活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和双蒸水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5-10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液），冰上匀浆后于4℃，12000g 离心15 min，取上清置于冰上待测。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万个细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）；然后4℃，12000g离心15min，取上清置于冰上待测。

3. 液体样本：直接检测，若有浑浊可离心后测定。

二、测定步骤

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至630nm，分光光度计蒸馏水调零。

2. 根据样本量取部分提取液和试剂一37℃预热10min。

3. 样本测定：（在1.5mL EP管或96孔中加入下列试剂）

混匀，常温放置30min，630nm处读取吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管，计算ΔA=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。空白管和标准管只需测1-2次。

注意事项：

1. 当ΔA大于0.8时，建议将上清液用提取液进一步稀释后测量，计算时乘以稀释倍数。

2. 试剂二配置后尽快使用，若发现变色则不能再用。

相关发表文献：

1. Fu Y, Lei F, Wang J, et al. Maternal Cigarette Smoke Exposure Disturbs Glutamate/GABA Balance in pFRG of Neonatal Rats[J]. Respiratory Physiology & Neurobiology, 2020: 103383.

2. Liu S, Li N, Lin Q, et al. Glutaminase 1 in mandarin fish Siniperca chuatsi: Molecular characterization, expression pattern and function involving in virus replication[J]. Aquaculture, 2020: 734924.

参考文献：

1. Mahajan R V, Saran S, Kameswaran K, et al. Efficient production of L-asparaginase from Bacillus licheniformis with low-glutaminase activity: optimization, scale up and acrylamide degradation studies[J]. Bioresource technology, 2012, 125: 11-16.

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