亲和层析填料 rProtein G Beads琼脂糖凝胶亲和层析介质（纯化树脂）

亲和层析填料 rProtein G Beads琼脂糖凝胶亲和层析介质（纯化树脂）
货号 ：R8300
规格 ：5ml
保存 ：2-8℃

产品 介绍 ：
     Protein G 是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白， 主要通过 Fc 片段结合哺乳动物IgG，但是不与狗 lgG 结合，不结合人 lgM、lgD 和 IgA。蛋白 A 与蛋白 G 不同来源及亚类的免疫球蛋白结合能力丌一样，具体见表。天然 Protein A 有五个 IgG 结合区域和一些未知功能的区域，重组 protein A 去除了与白蛋白及细胞表面结合位点，只含有五个 IgG 结合区域，减少了非特异性吸附。

rProtein G Beads  产品性能 ：

  Protein A  和   Protein G  对不同抗体的结合能力   ：

++++=结合能力强；  ++=结合能力中等；  —=结合能力弱或没有结合 

纯化流程 ：
1 、Buffer  的准备

所用水和 Buffer 在使用之前建议用  0.22µm 或 0.45 µm 滤膜过滤。 
结合/ 洗杂  Buffer:   0.15M NaCl，  20 mM Na 2 HPO 4 ，  pH 7.0
洗脱  Buffer: 0.1M 甘氨酸，  pH 3.0
中和液：   1M Tris-HCl， pH8.5

2 、 样品准备
     上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和 pH 值， 可以用结合/洗杂缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗杂缓冲液透析。
     样品在上样前建议离心或用  0.22µm 或 0.45µm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。 
3 、 样品纯化
    1) 将 rProtein A Beads 装入合适的层析柱，层析用 5 倍柱体积的结合 Buffer 进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。 
    2) 将样品加到平衡好的 rProtein A Beads 中（保证目的蛋白与 rProtein A Beads 充分接触，提高目的蛋白的回收率） ，收集流出液。 
    3) 用 10-15 倍柱体积的洗杂 Buffer 进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。    

    4) 使用 5-10 倍柱体积的洗脱  Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。 
    5) 依次使用 3 倍柱体积的结合  Buffer 和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料，后再用 5 倍柱 体积的 20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的 20%的乙醇中，置于 4 度保存，防止填料被细菌污染。


4 、   SDS-PAGE  检测
    将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用SDS-PAGE 检测纯化效果。 

填料清洗
    rProtein A Beads 可以重复使用而无需再生， 但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，严重影响柱子的性能，这时需要对树脂进行清洗。
去除一些沉淀或变性物质用 2 倍柱体积的 6M 盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用 5 倍柱体积的   PBS, pH 7.4 清洗。
    去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
    用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 2 倍柱体积的 1% Triton  X-100 清洗，然后然后立即用 5倍柱体积的   PBS, pH 7.4 清洗。 

问题及解决方案

亲和层析填料 rProtein G Beads琼脂糖凝胶亲和层析介质（纯化树脂）订购说明：

1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。 
2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。 
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日新价格为准。 
4、每日订单截止时间为16点整，部分城市可到17点整，因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后，将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。

运输说明：

1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝的箱子，然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
2、低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
3、常温产品：常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货，准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。