谷胱甘肽 S- 转移酶（GST）活性测定试剂盒

谷胱甘肽 S- 转移酶（GST）活性测定试剂盒
说明书
货号：BC0350
规格：50 管/48 样
产品简介：
谷胱甘肽 S-转硫酶（GST）是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。GST 是体
内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与谷胱甘肽巯基的共价结合，使亲电
化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外
的目的。因此，GST 在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外，因为 GST 具
有 GSH-Px 活性，亦称为 non-SeGSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如 DNA、蛋白质等的功能。
GST 催化 GSH 与 CDNB 结合，其结合产物的光吸收峰波长为 340nm，通过测定 340nm 波长处吸光度
上升速率，即可计算出 GST 活性。
试验中所需的仪器和试剂：
紫外-可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml 石英比色皿、双蒸水
产品内容：
试剂一：试剂一×1 支，用前充分溶解于 100ml 双蒸水中，4℃保存 3 个月
试剂二：粉剂二×1 支；稀释液二×1 管，用前将稀释液二加入粉剂二中充分溶解后加双蒸水 5.0ml，
4℃保存 3 个月
试剂三：粉剂三×1 支，4℃保存 3 个月，临用前加试剂一 5.0ml 充分溶解，临用前配制。
操作步骤：
一、样品测定的准备：
称约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心 10min，取上清(如上清不清澈，再离
心 3min)。
二、GST  测定操作
1、 混合试剂配制：将试剂二与试剂一按 1：8 混合
2、 试剂三放在 25℃预温
3、 分光光度计调到 340nm 处，设定时间为 5min，用双蒸水调零
4、 取 0.1ml 样品与 0.9ml 混合液混合，于 25℃预温 5min，再加入试剂三 0.1ml，迅速混匀，于 340nm 处
测定 5min 内吸光值的变化,第 0s 的吸光值记为 A1，第 300s 的吸光值记为 A2
5、 空白管测定为操作 4 中以 0.1ml 试剂一代替 0.1ml 样品液
酶活计算：
一、 血液 GST  活性计算
1、 GST 活力单位定义： 在 25℃下， 每 ml 血液每分钟催化 1μmol/L CDNB 与 GSH 结合的 GST 酶量为 1U。
2、 计算公式：
GST（U/ml）=ΔA 340 /min×〔10 6 / (ε·d) 〕×（V总/V样）=ΔA /min×10 6 / (9.6×10
3 ×1) 〕×1.1/0.1
340
=ΔA /min×1145.83
340
△A 340 =△A 测定管 -△A 空白管 ，△A 测定管 与△A 空白管 均等于（A2-A1）/5，即每分钟吸光值变化
3 mol/L • cm
ε：产物在 340nm处摩尔吸光系数为 9.6×10
10 6 ：摩尔分子换算成微摩尔分子
d ：比色杯光径（cm）
V 总：反应总体积（ml）
V 样：所用样品体积（ml）
二、  组织 GST  活性计算
1、 GST 活力单位定义：在 25℃下，每毫克蛋白每分钟催化 1μmol/L CDNB 与 GSH 结合的 GST 酶量为
1U。
2、 计算公式：
GST（U/mg）=△A 340 /min×[10 6 / (ε •d)]×(V总/V 样)÷Cpr =△A 340 /min×10 6 /(9.6×10 3 ×1)×1.1/0.1÷Cpr
=△A 340 /min×1145.83÷Cpr
△A 340 =△A 测定管 -△A 空白管 ，△A 测定管 与△A 空白管 均等于（A2-A1）/5，即每分钟吸光值变化
3  mol/L • cm
ε：产物在 340nm处摩尔吸光系数为 9.6×10
10 6 ：摩尔分子换算成微摩尔分子
d：比色杯光径（cm）
V 总：反应总体积（ml）
V 样：所用样品体积（ml）
Cpr：蛋白浓度（mg/ml）
注意事项：
a) 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力
b) 本法测定 GST 活性的线性范围可达 76U/L，测定前先用 1～2 个样做预实验，如 5min 内反应不成线性，
须对样品做相应稀释，稀释时用样品提取液稀释，计算结果乘以稀释倍数。
c) 测定反映的温度对测定结果有影响，请控制在 25℃
不同测定材料中 GST  酶液提取的注意事项
哺乳动物溶血液的配制：
①取肝素抗凝全血(人)20μL，以蒸馏水稀释 1mL，配成 1：49 的溶血液；取肝素抗凝全血(鼠)10μL 加
蒸馏水 1mL，配成 1：99 的溶血液。
②充分混匀，放置 5 分钟直使玻璃管中的溶血液对光呈*透明状，方可进行检测。
③已配好的溶血液中酶活力只能保持 45-60 分钟，天冷时可延迟 120 分钟。如果当天来不及测定则以抗
凝全血冰箱（4-8℃）保存，2-3 天内酶活力变化不大。
哺乳动物组织中 GST 的提取：由于哺乳动物组织中酶活力较大，为保证灵敏度，要注意用试剂一将酶提取
液进行稀释，肝脏稀释 50 倍左右，肾脏稀释 20 倍左右。计算酶活力时乘以相应稀释倍数。
细胞处理：收集约 2× 10
4 个细胞，冷冻干燥后，加入 1 mL 试剂一。超声破壁细胞(950 W，30%，15 min，
工作 1 s间隔 2 s)，再经 1,0000r 4℃高速离心 10 min，上清待测。
其它步骤按照试剂盒说明书操作即可。

相关文献：

 《Systemic response of the stony coral Pocillopora damicornis against acute cadmium stress》 作者:Zhi Zhou,Xiaopeng Yua,Jia Tang,Yibo Wu,Lingui Wang,Bo Huang 期刊:Aquatic Toxicology 影响因子:3.794 PMID:29179148
《Transcriptome Sequence Analysis Elaborates a Complex Defensive Mechanism of Grapevine (Vitis vinifera L.) in Response to Salt Stress》 作者:Le Guan , Muhammad Salman Haider , Nadeem Khan , Maazullah Nasim , Songtao Jiu , Muhammad Fiaz , Xudong Zhu , Kekun Zhang  and Jinggui Fang  期刊:International Journal of Molecular Sciences 影响因子:4.183 PMID:30545146
《2′,4′-Dihydroxy-6′-methoxy-3′,5′-dimethylchalcone, a potent Nrf2/ARE pathway inhibitor, reverses drug resistance by decreasing glutathione synthesis and drug efflux in BEL-7402/5-FU cells》 作者:Xing Wei,Xuejun Mo,Faliang An,Xiang Ji,Yanhua Lu 期刊:Food and Chemical Toxicology 影响因子:3.775 PMID:29626576
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影响因子:4.259 PMID:29503638
《Cadmium detoxification induced by salt stress improves cadmium tolerance of multi-stress-tolerant Pichia kudriavzevii》 作者:Chunsheng Li,Xianqing Yang,Ying Xu,Laihao Li,Yueqi Wang 期刊:Environmental Pollution 影响因子:5.714 PMID:30036838
《Effects of Phytase Transgenic Maize on the Physiological and Biochemical Responses and the Gut Microflora Functional Diversity of Ostrinia furnacalis》 作者:Xiao Hui Xu, Yinghui Guo, Hongwei Sun, Fan Li, Shuke Yang, Rui Gao & Xingbo Lu  期刊:Scientific Reports 影响因子:4.011 PMID:29535326
《Acid stress induces cross-protection for cadmium tolerance of multi-stress-tolerant Pichia kudriavzevii by regulating cadmium transport and antioxidant defense system》 作者:Chunsheng Li,Ying Xu,Laihao Li,Xianqing Yang,Yueqi Wang 期刊:J. Hazard. Mater 影响因子:7.65 PMID:30513442

谷胱甘肽 S- 转移酶（GST）活性测定试剂盒

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