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  • 二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶测试盒 辅酶
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产品名称:

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶测试盒 辅酶

产品品牌: SOLARBIO/索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2024-07-29
储存条件
-20℃
中文名称
二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶测试盒 辅酶
有效期
6个月
单位

英文名称
Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit
检测方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
规格
50T/48S ; 25T/24S

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝CAS详询
分子式详询纯度详询
分子量详询货号BC0440
规格25T/24S 50T/48S供货周期现货
主要用途二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶测试应用领域环保,化工,生物产业,农业,综合


二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作
货号:BC0440
规格:25T/24S50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称/规格 25T50T保存条件
提取液液体25 mL×1瓶液体50 mL×1瓶4℃保存
试剂一液体25 mL×1瓶液体50 mL×1瓶4℃保存
试剂二粉剂×1粉剂×1-20℃保存
试剂三粉剂×2粉剂×2-20℃保存
试剂四粉剂×1粉剂×1-20℃保存

25T溶液的配制:

  1. 试剂三:临用前1加入0.5mL蒸馏水充分溶解待用,振荡溶解后若出现浑浊可以离心使用;

  2. 试剂四:临用前加入1mL 蒸馏水充分溶解待用;

  3. 工作液的配制:临用前在试剂二中加入全部试剂一,充分混匀,在25℃孵育5min

50T溶液的配制:
1试剂三:临用前1加入1 mL蒸馏水充分溶解待用,振荡溶解后若出现浑浊可以离心使用
2试剂四:临用前加入2 mL 蒸馏水充分溶解待用;
3工作液的配制:临用前在试剂二中加入全部试剂一,充分混匀,在25℃孵育5min
产品说明:
1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶(Rubisco, EC 4.1.1.39)是植物光合作用中的一个关键酶,既控制着CO2的固定,同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流,其活性的大小直接影响着光合速率。在Rubisco的催化下,1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)与1分子的CO2结合,产生2分子的3-磷酸甘油酸(PGA);PGA可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用,产生甘油醛-3-磷酸,伴随着NADH氧化生成NAD+;在340nm NADH有特征吸收峰,而NAD+没有此吸收峰,因此测定340nm吸光度下降速率可以代表Rubisco的羧化酶活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
自备的仪器和用品
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:

  • 处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献

1、细菌或细胞样本的制备:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次);10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、称取约0.1g组织加入1mL提取液,冰浴中匀浆。10000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。建议选取新鲜的植物样本。

二、测定步骤

  1. 紫外分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

  2. 按下表步骤加样:

试剂名称测定管空白管
样本(μL100-
蒸馏水(μL-100
试剂三(μL3535
试剂四(μL3535
工作液(μL900900

记录340nm处20s时吸光值A15min20s时的吸光值A2,计算ΔA测定=A1测定-A2测定。ΔA空白=A1空白-A2空白;ΔA =ΔA测定-ΔA空白。反应温度保持在25℃。(空白管只做1-2管
三、Rubisco活性计算

  1. 按样本蛋白浓度计算

单位的定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1 nmol NADH为一个酶活力单位。
Rubisco活力(U/mg prot=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(Cpr×V样) ÷T =344×ΔA÷Cpr

  1. 按样本质量计算

单位的定义:25℃中每 g组织每分钟氧化1 nmol NADH为一个酶活力单位。
Rubisco活力(U/g 质量)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(V样÷V样总×W) ÷T=344×ΔA÷W

  1. 按细菌或细胞数量计算

单位的定义:25℃中每1万个细菌或细胞每分钟氧化1 nmol NADH为一个酶活力单位。
Rubisco活力(U/104 cell)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(V样÷V样总×500) ÷T=0.69×ΔA
V反总:反应体系总体积,1.07×10-3L;εNADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.1mLV样总:加入提取液体积,1mLT:反应时间,5minW样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万;109:单位换算系数,1mol=109nmol。
实验实例:

  1. 取0.1g植物叶片,加入1mL提取液进行匀浆研磨,取上清之后按照测定步骤操作,测得计算ΔA测定管= A1测定-A2测定=1.279-1.206=0.073ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.834-0.823=0.011ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.073-0.011=0.062,按样本质量计算酶活得:Rubisco活力(U/g 质量)=344×ΔA÷W=344×0.062÷0.1=213.28 U/g 质量

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