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产品名称:

小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒

产品品牌: 索莱宝 价格: 2600
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2022-08-16
Solarbio ELISA 试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒是将抗小鼠TNF-α单克隆抗体包被在酶标板上;分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本;洗板后加入生物素化抗小鼠TNF-α抗体;后,在λmax=450 nm(OD=450 nm)处测定反应孔样品吸光度(OD),通过计算出样本中小鼠TNF-α的浓度。​

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号SEKM-0034
规格96T供货周期现货
主要用途小鼠TNF-α含量测定应用领域医疗卫生,环保,化工,农业
 

小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒

注意事项:※※※
1.试剂盒应在有效期内使用,请不要使用过期的试剂。
2.试剂盒未使用时应保存在2-8℃冰箱,已复溶但未用完的标准品,请丢弃。
3.试剂盒使用前请在室温恢复30 min,且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。
4.在试验中标准品和样本建议作复孔检测,且加入试剂的顺序应保持*。
5.为避免交叉污染,请在试验中使用1次性试管,枪头,封板膜(※)及洁净塑料容器。.
6.浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少,在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶 盖上,使用前请离心处理(5-10 S即可),使管壁上的液体集中在管底部,取用时,请用移液器小心吹打几次。
7.除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外,请不要使用其他来源试剂盒内含的        试剂代替本试剂盒中的某单个组分。
8.为保证结果准确,每次检测均需做标准曲线。

安全提示:

试剂盒中的终止液为酸性溶液,操作人员在使用时请带上手套并注意防护;在操作过程中也要避免试剂接触皮肤和眼睛,如果不慎接触,请用大量清水清洗;检测血液样本及其它体液样本时,请按国家生物实验室安全防护有关管理规定执行。

自备实验器材(不提供,可代购)
1.酶标仪(主波长450nm,参考波长630nm)
2.高精度移液器及一次性吸头:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3.洗板机或洗瓶
4.37℃孵育箱
5.双蒸水,去离子水,量筒等
6.稀释用聚丙烯试管

 

小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒

 

样本收集及储存:
1.细胞培养上清:
将细胞培养基移无菌离心管,在4℃条件下1000×g离心10 min,然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存(24小时内检测可放入2-8℃储存),避免反复冻融。
2.血清样本:
室温血液自然凝固20 min后,在4℃条件下1000×g离心10 min,然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存(24小时内检测可放入2-8℃储存),保存过程中如有沉淀,请再次离心,避免反复冻融。
3.血浆样本:
将全血收集到含抗血凝剂的管中,根据标本的实际要求选择EDTA,柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合20 min,在4℃条件下1000×g离心10 min,然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存(24小时内检测可放入2-8℃储存),避免反复冻融。

※注意:

血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本,以免影响检测结果;如果样本中的靶标物检测浓度高于标准品的值,请将样品做适当倍数稀释后检测,建议正式实验前做预实验以确定稀释倍数。

 

小鼠肿瘤坏死因子α

试剂准备:
1.试剂回温:首先在实验前30 min将试剂盒,待测样本放置于室温下,浓缩洗涤液如出现结晶,请放入37℃温浴直到结晶全部溶解。
2.配制洗涤液:预先计算好稀释后的洗涤液使用体积,然后用双蒸水或去离子水将20倍浓缩洗涤液稀释成1倍应用液,未用完的浓缩洗涤液放入4℃冰箱保存。
3.标准品梯度稀释:加入标准品/样本稀释液(SR1)1ml冻干标准品中,静置15分钟待其*溶解后轻轻混匀(浓度为2000pg/ml),然后按照以下浓度:2000、1000、 500、 250、125、62.5、31.25、 0 pg/ml进行稀释。复溶过的标准品原液(2000pg/ml)未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装,并将其贮存在-20~-80℃冰箱,具体如下图。

4.生物素化抗体工作液:预先计算好试验所需用量,用生物素化抗体稀释液(SR2)将100倍抗体浓缩液稀释成1倍应用工作液(稀释前充分混匀),请在30分钟内加入到反应孔中。




5.酶结合物工作液:按每次试验所需用量配制,用酶结合物稀释液(SR3)将40倍浓缩酶结合物稀释成1倍应用工作液(稀释前离心),请在30分钟内使用。



6.洗涤方法:
自动洗板:甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,注入洗涤液为300ul/孔,注与吸出间隔为30秒,洗板5次。
手工洗板:甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,用洗瓶加入洗涤液300ul/孔,静止30秒后甩净酶标板孔中液体,在厚迭的吸水纸上拍干,洗板5次。

 

结果判断:
1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测,参考波长为 630 nm。如不能进行双波长检测,请用 450 nm 的OD测定值减去630 nm的OD测定值。
2.计算标准品、样品的平均OD值:每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值
3.以标准品浓度为横坐标,吸光度OD值为纵坐标,用软件绘制标准曲线,样品中TNF-α含量可通过对应OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限,应做适当稀释后重新检测,计算浓度时再乘以稀释倍数。


TNF-αELISA KIT(Mouse)参数表征:



1. 数据及标准曲线

本图仅供参考,应以当次试验标准品绘制的标准曲线计算小鼠TNF-α样本含量

 

2. 灵敏度:
低可检测小鼠TNF-α浓度达15pg/ml,
20个零标准品浓度OD的平均值加上两个标准差,计算相应的可检测浓度。

3. 特异性:
不与小鼠M-CSF 、GM-CSF、LIF、SCF、TNF-β、VEGF等反应,人的TNF-α、TNF sRI、TNF sRII等反应

4. 重复性:
板内,板间变异系数<10%

5. 回收率:
在选取的健康小鼠血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的小鼠TNF-α,计算回收率。


6. 线性稀释:
分别在选取的4 份健康小鼠血浆和细胞培养上清中加入高浓度小鼠 TNF-α,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。

 

 

常见问题及解决方法:

 

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