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产品名称:

猪外周血淋巴细胞分离液试剂盒

产品品牌: 索莱宝 价格: 700
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2020-04-15
猪外周血淋巴细胞分离液试剂盒
货号:P8770
规格:200ml/KIT
保存 :室温避光储存,有效期少 2 年。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号P8770
规格200ml供货周期现货
主要用途外周血淋巴细胞分离液试剂盒应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

猪外周血淋巴细胞分离液试剂盒
货号 :P8770
规格 :200ml
保存 :室温避光储存,有效期少 2 年。


产品简介 :
    本分离液为Ficoll、淀粉550与泛影酸葡jia胺的混合液。抗凝外周血可在分离液中分层。离心时,在Ficoll、淀粉的作用下红细胞与粒细胞聚集并迅速沉降;此时,淋巴细胞及其他单个核细胞仍处于分离液上层,红细胞污染可忽略不计。大部分血小板可在细胞清洗低速离心过程中去除。 其他人及动物多种比重细胞分离液,因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞带电不同,用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。
   适用于从猪抗凝血液中分离淋巴细胞,无菌条件下所分离的淋巴细胞可用于细胞培养等。本品仅供科研使用。


注意事项 :
    A.本实验要求,在正常大气压下,分离液、分离样本以及分离环境温度为20℃±2℃。分离液在低温时呈较高密度,在高温时呈较低密度。细胞分离液从冰箱取出后,不可立即使用,操作前可将样本和分离液复温18-22℃。为获得的实验结果,好在取血后2小时内进行实验,血液提取后存放时间越长细胞活性越低。
    B.实验过程中,如需稀释血液或洗涤细胞,不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集,大大降低细胞得率及纯度。
    C.优抗凝剂选择:EDTA、枸橼酸、肝素,其他抗凝剂也可使用,但会影响细胞活性。应注意在血液稀释过程中去除抗凝剂体积。
    D.实验操作时,不可使用含粉手套、不可使用内毒素含量过高的液体,手套中的粉末颗粒及高内毒素会激活淋巴细胞从而降低细胞得率及活性。
    E.本实验不可使用高聚合材质(如聚苯乙烯)的塑料制品,其带有的静电作用将导致细胞贴壁影响分离效果。推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。
    F.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。吸取过多的淋巴细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。
    G.如需进行B、T细胞计数,则需血液贮藏时间不得多于10小时,否则将导致细胞被激活,得率降低。
    H.为去除所混杂的血小板,可在分离液上层加上4-20%蔗糖梯度等渗溶液进行二次离心。
    I.细胞纯度可在步骤10后使用瑞氏染色方法确定,细胞活性可用台盼蓝处理后观察。
    J.由于各品牌离心机的性能不同,国内南北地区温度环境和四季的差异,可能影响分离效果,用户可以调节离心转数和离心时间,摸索的分离条件(具体分离条件各实验室自定)。

 

分离方法 :
一、当血液样本小于3ml时,实验方法如下:
    1. 取一支15ml离心管,加入3ml分离液置于18-22℃复温。
    2. 将血液样本小心加于分离液之液面上。18-22℃,400g离心20分钟。低温(如4℃)离心会降低细胞得率。
    3. 离心后,用吸管小心吸出分离液上层(包含淋巴细胞的细胞层)0.5cm以上的上清液部分,弃去。
    4. 用吸管小心吸取分离液层及淋巴细胞层于另一新离心管内。
    5. 在步骤4中所得离心管中加入10ml PBS缓冲液或HBSS缓冲液混匀。
    6. 250g离心10分钟。
    7. 弃上清。
    8. 用吸管以5ml PBS缓冲液或HBSS缓冲液重悬所得细胞。
    9. 250g离心10分钟。
    10. 弃上清。重复步骤7、8、9,后以0.5ml后续试验所需相应液体重悬细胞。
二、当血液样本大于3ml时,实验方法如下:
    1. 当血液样本粘度过高或血液样本大于等于3ml时,优稀释方法:将血液于18-22℃以250g离心10分钟,弃去血浆,补充添加生理盐水,添加量为所弃去血浆体积的1.5-2倍,混匀备用。注:不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。
    2. 取一支适当的离心管,加入分离液(加入量与稀释后的血液样本体积相等),置于18-22℃复温。
    3. 将经稀释处理的血液样本小心加于分离液之液面上。18-22℃,400g离心20分钟。低温(如4℃)离心会降低细胞得率。注:加入血液样本后,样本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二。
   4. 剩余步骤同“情况一”中步骤3步骤10。

 

产品性能指标 

pH 7.0-7.5
渗透压 280-340mOsmol/kg
内毒素 ≤0.5EU/ml
无菌 直接接种培养14 天后培养基澄清
澄明度及不溶性颗粒物 每50ml 溶液中含10µm 以上的不溶性微粒20 粒以下,含25µm 以上的不溶性微粒5 粒以下
贮藏及保存期限 :
本分离液是敏光型的,应在18℃-25℃避光保存,有效期两年。启封后置4℃保存,溶液变浑浊或污染细菌时,产品失效。保存温度较低(10℃以下)时分离液易出现白色结晶,影响分离效果。

 

猪外周血淋巴细胞分离液试剂盒

 参考文献:
《An alternative pathway of enteric PEDV dissemination from nasal cavity to intestinal mucosa in swine》 作者:Yuchen Li, Qingxin Wu, Lulu Huang, Chen Yuan, Jialu Wang & Qian Yang  期刊:Nature Communications 影响因子:11.878 PMID:30232333
《Interferon as a Mucosal Adjuvant for an Influenza Vaccine in Pigs》 作者:Lirong LiuWenhui FanHe ZhangShuang ZhangLiang CuiMeng WangXiaoyuan BaiWenxian YangLei SunLimin YangWenjun LiuEmail authorJing Li 期刊:Virologica Sinica 影响因子:2.467 PMID:30989429
《Generation of porcine monoclonal antibodies based on single cell technologies》 作者:Kongpan Li,Jianhui Bai,Lijuan Du,Xifeng Wang,Cuncun Ke,Wei Yan,Changqing Li,Liming Ren,Haitang Han.Yaofeng Zhao 期刊:Veterinary Immunology and Immunopathology 影响因子:1.846 PMID:31420069
《Immunogenicity and protective efficacy of recombinant proteins consisting of multiple epitopes of foot-and-mouth disease virus fused with flagellin》 作者:Baofeng Cui,Xinsheng Liu,Peng Zhou,Yuzhen Fang,Donghong Zhao,Yongguang Zhang,Yonglu Wang 期刊:Appl. Microbiol. Biotechnol. 影响因子:3.67 PMID:30888465
《Effect of route of inoculation on innate and adaptive immune responses to porcine epidemic diarrhea virus infection in suckling pigs》 作者:Yingshan Zhou,Cong Chen,Yunlu Chen,Ziqi Liu,Jingyou Zheng,Tingjun Wang,Hao Luo,Yajie Liu,Ying Shan, Weihuan Fang,Xiaoliang Li 期刊:Vet. Microbiol. 影响因子:2.791 PMID:30593385

 

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