蛋白质羰基含量检测试剂盒 微量法

蛋白质羰基含量检测试
剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1275
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：使用前根据样本数，每支加1mL水震荡溶解后离心取上清使用，每支为10个样本用量，溶液变黑后即不可再继续使用。

2. 试剂五：自备乙酸乙酯和无水乙醇，根据测定样本量，将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。（提供1个60mL空瓶）

产品说明：
蛋白质羰基化是指氨基酸残基侧链中的氨基或亚氨基受到氧自由基攻击最后转变成醛基，并释放NH₃⁺的过程.其在体内的形成主要是通过金属离子催化氧化系统完成。蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。
羰基与2,4--*反应生成2,4-*腙，在370nm处有特征吸收峰。
Protein Carbonyl + 2, 4-Dinitrophenylhydrazine              2, 4-Dinitrobenzene (370nm)
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
天平、恒温水浴锅/培养箱、低温离心机、超声细胞破碎仪、漩涡震荡仪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、蒸馏水、无水乙醇、乙酸乙酯。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：
1. 试剂一使用前根据要测定的样本数现配，配置好后4℃保存，若变为黑色，则不能使用。
实验实例：

1. 取0.1g小鼠心脏加入1mL提取液充分匀浆后于4℃，5000rpm离心10min，取上清，加入0.1mL试剂一，室温放置10min，4℃，12000rpm离心10min，取上清，按照测定步骤操作，用96孔UV板测得A_370测定管=0.723，A_370对照管=0.609，按样本质量计算酶活得：

蛋白质羰基含量（μmol/g质量）=（A_370测定管-A_370对照管）÷9.6÷W=0.1188 μmol/g质量。

1. 取0.1g国槐加入1mL提取液充分匀浆后于4℃，5000rpm离心10min，取上清，加入0.1mL试剂一，室温放置10min，4℃，12000rpm离心10min，取上清，按照测定步骤操作，用96孔UV板测得A_370测定管=0.127，A_370对照管=0.071，按样本质量计算酶活得：

蛋白质羰基含量（μmol/g质量）=（A_370测定管-A_370对照管）÷9.6÷W=0.0583 μmol/g质量。

1. 取胎牛血清样本按照说明步骤操作，直接测定，用96孔UV板测得A_370测定管=0.344，A_370对照管=0.145，按液体体积计算酶活得：

蛋白质羰基含量（μmol/mL）=（A_370测定管-A_370对照管）÷10.56=0.0188 μmol/mL。
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