L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶测试盒 微量法

L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶
（Gal LDH）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC1255
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前加入16 mL蒸馏水，充分溶解；

2. 试剂二：临用前加入2 mL蒸馏水，充分溶解。

产品说明：
L-半乳糖途径是合成AsA的主要途径。Gal LDH位于线粒体内膜，负责催化植物体内AsA生物合成的最后一步，也是该途径的关键酶之一，对植物体内AsA含量的积累起着至关重要的作用。
Gal LDH催化L-半乳糖内酯还原氧化型细胞*C(Cyt c)，还原型Cyt c在550nm有吸收峰；测定还原型Cyt c增加速率，来计算Gal LDH活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液器、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：
1、在测定酶活时要注意温度。建议取小烧杯一只装入一定量的25℃蒸馏水，将此烧杯放入25℃水浴锅中，在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中；若使用96孔板，反应期间应放入25℃培养箱中。
2、建议两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。
3、加入最后一种试剂后需迅速混匀并测定OD值。
实验实例：

1. 取0.1g土豆加入1mL提取液冰上充分研磨，13000g 4℃离心10min，取上清液置冰上，按照测定步骤操作，用微量比色皿测得计算ΔA测定管=A4-A3=0.9253-0.7844=0.1409，ΔA空白管=A2-A1=0，按样本质量计算酶活得：Gal LDH（U/g 质量）=0.289×(ΔA测定管-ΔA空白管) ÷W=0.4072 U/g 质量。

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