蔗糖合成酶(SS)活性检测试剂盒 微量法

蔗糖合成酶（SS）
活性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC0585
规格：100T/48S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：
试剂二：临用前加1 mL水，配制成10 mg/mL蔗糖溶液，再将其用蒸馏水稀释为500μg/mL备用。
产品说明：
蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库"器官运输的主要形态。SS（EC 2.4.1.13）催化植物体内游离果糖和葡萄糖合成蔗糖。
SS催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖，蔗糖与间*酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。   
二、测定步骤

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至480nm，蒸馏水调零。

2. 样本测定（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）：

混匀，80℃水浴保温20min，冷却后，12000rpm常温离心10min。吸取200μL上清液于微量玻璃比色皿或者96孔板中，在480nm下测定各管吸光值（标准管和空白管只做1-2管，每个测定管需要设定一个对照管）。
计算ΔA测=A测定管-A对照管，ΔA标=A标准管-A空白管。
三、SS活力单位的计算

1. 按照蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生1µg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SS活性(U/mg prot)=（C标准管×V1×ΔA测÷ΔA标）÷(V1×Cpr)÷T=50×ΔA测÷ΔA标÷Cpr

1. 按照样本质量计算

单位定义：每 g 组织每分钟催化产生1µg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SS活性(U/g 质量)=（C标准管×V1×ΔA测÷ΔA标）÷(W×V1÷V2)÷T=50×ΔA测÷ΔA标÷W
C标准管：标准管浓度，500µg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；T：反应时间，10min。
注意事项：
尽量在30min内完成测定。
参考文献：

1. Schrader S, Sauter J J. Seasonal changes of sucrose-phosphate synthase and sucrose synthase activities in poplar wood (Populus× canadensis Moench ‘robusta’) and their possible role in carbohydrate metabolism[J]. Journal of Plant Physiology, 2002, 159(8): 833-843.

2. Nomura T, Akazawa T. Enzymic mechanism of starch synthesis in ripening rice grains: VII. Purification and enzymic properties of sucrose synthetase[J]. Archives of biochemistry and biophysics, 1973, 156(2): 644-652.

3. Pressey R., Potato sucrose synthetase: purification, properties, and changes in activity associated with maturation[J]. Plant physiology, 1969, 44(5): 759-764.

相关系列产品：
BC0600/BC0605  蔗糖磷酸合成酶（SPS）活性检测试剂盒
BC2460/BC2465  植物蔗糖含量检测试剂盒
BC0560/BC0565  酸性转化酶（AI）活性检测试剂盒
BC0570/BC0575  中性转化酶（NI）活性检测试剂盒
BC4310/BC4315  蔗糖合成酶（分解方向，SS-I）活性检测试剂盒
BC4320/BC4325  细胞壁结合酸性转化酶（CWI）活性检测试剂盒  

蔗糖合成酶(SS)活性检测试剂盒 微量法 蔗糖合成酶(SS)活性检测试剂盒 微量法