ADPG焦磷酸化酶(AGP)活性检测试剂盒 微量法

腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（AGP）活性检测试剂盒说明书
微量法 
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0435
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前取1瓶试剂二A加入5mL试剂二B充分溶解，用不完的试剂建议-20℃分装保存4周，避免反复冻融；

2. 试剂三：临用前取1瓶加3 mL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂建议-20℃分装保存4周，避免反复冻融；

3. 试剂四：临用前取1支加入500 μL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。

4. 试剂五：临用前加入500 μL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存8周，避免反复冻融。

产品说明：
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。
AGP催化的逆向反应生成G-1-P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：

1. 如果一次性测定样本较多，可以将试剂一、二按比例配成混合液1，将试剂一、三、四和五按比例配成混合液2。

2. 若测定数值较小，可以加大样本量或者延长第二步反应时间。

实验实例：

1. 取0.1g柳树叶片加入1mL提取液冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清置冰上，之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算ΔA=A2-A1=0.5784-0.4855=0.0929，按样本质量计算酶活得：

AGP活性（U/g 质量）=380.5×ΔA÷W=353.48 U/g 质量。
参考文献：

1. Baroja-Fernández E, Zandueta-Criado A, Rodrı́guez-López M, et al. Distinct isoforms of ADPglucose pyrophosphatase and ADPglucose pyrophosphorylase occur in the suspension‐cultured cells of sycamore (Acer pseudoplatanus L)[J]. FEBS letters, 2000, 480(2-3): 277-282.

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