组织及血液酸性磷酸酶活性测试盒 微量法

组织及血
液酸性磷酸酶（ACP）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2135
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：
1、标准品：10μmol/mL酚标准液，临用前蒸馏水稀释至0.625μmol/mL备用（可以吸取20μL 10 μmol/mL酚标准液和300μL蒸馏水混合备用），稀释后的标准液2-8℃保存一周。
产品说明：
ACP（Acid Phosphatase）在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸，常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。
在酸性环境中，ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯*，苯*与4-氨基安*比林和铁*反应生成红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算ACP活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
组织样本：称取约0.1g组织，加提取液1mL充分研磨，4℃，10000rpm离心10min，取上清液待测。
血浆（血清）：血液可直接用于测定，如果浓度高的话，用提取液稀释。
二、测定步骤
1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到510nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、试剂一置于37℃水浴中预热30min以上。
3、操作表：

 

三、ACP活性计算
1、按蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μmol酚为一个酶活力单位。
ACP酶活 (U/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(Cpr×V样)÷T
                      =0.0417× (A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr
2、按样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生1 μmol酚为一个酶活力单位。
ACP 酶活 (U/g 质量)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样] ÷(W÷V提取×V样)÷T
                      =0.0417×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3、按血液体积计算
活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
ACP酶活 (U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样] ÷V样÷T
                   =0.0417×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
C标准品：标准品浓度，0.625μmol/mL；V样：加入反应体系中上清液体积，0.02mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；T：反应时间，15min；V提取：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g。
注意事项：
1、 试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。
2、 试剂三变蓝绿色后不能再使用。
3、 加入试剂三后必须立即混匀，否则显色不全。
4、 ACP不稳定，尤其在37℃和pH大于7的条件下活力丧失快，因此酸性磷酸酶样本一般需当天准备；血清样本中，每毫升血清中加入10mg柠檬酸氢二钠或者5mg硫 酸氢钠，使pH降至6.5以下，或5mL血清加入30% 醋 酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。
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