胃*白酶活性检测试剂盒 微量法

胃*白酶活性检测
试剂盒说明书
微量法
货号：BC2325
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前加入10 mL试剂二，充分溶解；

2. 试剂三：临用前加入10 mL蒸馏水，充分溶解。

产品说明：
胃*白酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃*白酶分泌的减少。
胃*白酶可催化血红蛋白水解，水解产物*氨酸在275nm下有特征吸收峰。通过测定吸光值的变化来计算酶活。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约0.1g组织加入1mL提取液进行冰浴匀浆或者0.1mL胃液加入0.9mL提取液。10000rpm 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至275nm，蒸馏水调零。

2. 操作表：

注意：对照管后加样本，而测定管先加样本

• 胃*白酶活性计算

1. 用微量石英比色皿

1、按样本蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成1μmol*氨酸为一个酶活单位。
胃*白酶酶活（U/mg prot）=（∆A÷ε÷d×V反总）÷（Cpr×V样本）÷T=0.786×∆A÷Cpr
2、按样本质量计算
活性单位定义：37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成1μmol*氨酸为一个酶活单位。
胃*白酶酶活（U/g 质量）=（∆A÷ε÷d×V反总）÷（W×V样本÷V提）÷T=0.786×∆A÷W
3、按液体体积计算
活性单位定义：37℃下每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成1μmol*氨酸为一个酶活单位。
胃*白酶酶活（U/mL）=（∆A÷ε÷d×V反总）÷（V样本÷V提×V液）÷T= 7.86×∆A
Cpr：样本蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W：样本质量，g；V反总：反应总体积，0.22mL；V提：粗酶液总体积，1mL；T：催化反应时间，10min；V样本：加入样本体积，0.02mL；V液：液体体积，0.1mL；ε：*氨酸吸光系数，1.4μmol^-1·mL·cm^-1；d：光程，1cm。
B、用96孔UV板
1、按样本蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成1μmol*氨酸为一个酶活单位。
胃*白酶酶活（U/mg prot）=（∆A÷ε÷d×V反总）÷（Cpr×V样本）÷T = 1.31×∆A÷Cpr
2、按样本质量计算
活性单位定义：37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成1μmol*氨酸为一个酶活单位。
胃*白酶酶活（U/g 质量）=（∆A÷ε÷d×V反总）÷（W×V样本÷V提）÷T =1.31×∆A÷W
3、按液体体积计算
活性单位定义：37℃下每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成1μmol*氨酸为一个酶活单位。
胃*白酶酶活（U/mL）=（∆A÷ε÷d×V反总）÷（V样本÷V提×V液）÷T =13.1×∆A
Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W：样本质量，g；V反总：反应总体积，0.22mL；V提：粗酶液总体积，1mL；T：催化反应时间，10min；V样本：加入样本体积，0.02mL；V液：液体体积，0.1mL；ε：*氨酸吸光系数，1.4μmol^-1·mL·cm^-1；d：光程，0.6cm。
实验实例：

1. 取0.1g小鼠胃加入1mL提取液充分研磨，10000rpm 4℃离心10分钟，取上清稀释2倍，置冰上，按照测定步骤操作，使用微量石英比色皿测得计算∆A=A测定-A对照=1.3345-1.2195=0.115，按样本质量计算酶活得：

胃*白酶酶活（U/g 质量）=0.786×∆A÷W×2（稀释倍数）=1.808 U/g 质量。
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