酸性木聚糖酶活性检测试剂盒 微量法

酸性木聚糖酶（ACX）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2605
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：
1、标准品：10mg木糖。临用前加入667μL缓冲液配成100μmol/mL的标准品溶液，2-8℃保存8周。
产品说明：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，酸性木聚糖酶（ACX）一般分离自耐酸的真菌，细菌及部分霉菌。
ACX在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴条件下与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值增加速率，可计算ACX活力。


注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、可调式移液枪、冰、蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：
吸光度变化应该控制在0.01~1.3之间，否则加大样本量或稀释样本，注意同步修改计算公式中的稀释倍数。
实验实例：

1. 取0.1079g蓝莓加入1mL缓冲液进行匀浆研磨，取上清用蒸馏水稀释20倍后按照测定步骤操作，用96孔板测得ΔA测定=A测定- A对照=0.933-0.795=0.138，带入标曲y=0.2652x-0.0355（R²=0.9992），计算x=0.654，按样本质量计算ACX活性得：ACX活力（U/g 质量）= x÷W÷30×F =0.654÷0.1079÷30×20=4.041 U/g 质量。

2. 取泡菜汁离心取上清按照测定步骤操作，用96孔板测得ΔA测定=A测定- A对照=0.354-0.245=0.109，带入标曲y=0.2652x-0.0355（R²=0.9992），计算x=0.545，按发酵液计算ACX活力得：ACX活力（U/mL）= x÷T×F =0.545÷30×1=0.018U/mL。

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