品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | CAS | 详询 |
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分子式 | 详询 | 纯度 | 详询 |
分子量 | 详询 | 货号 | BC3085 |
规格 | 100T/48S | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 土壤α-葡萄糖苷酶(S-α-GC)检测试剂盒 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业,综合 |
土壤α-葡萄糖苷酶(S-α-GC)活性
检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC3085
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体0.5mL×1支(自备) | 2-8℃保存 |
试剂二 | 粉剂×2瓶 | -20℃保存 |
试剂三 | 液体15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 液体30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
试剂一:自备甲苯,2-8℃保存;
试剂二:临用前取1瓶加入5 mL蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂-20℃分装保存4周;
标准品:5 mmol/L的对硝 基苯* 溶液。
产品说明:
S-α-GC能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
S-α-GC能够催化对-硝 基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝 基苯*,后者在400nm有特征光吸收。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、30-50目筛、研钵、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可参考文献)
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30-50目筛。
二、测定步骤
分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至400nm,分光光度计蒸馏水调零。
标准品:取20μL 5mmol/L的对硝基 苯 * 溶液,加入980μL蒸馏水,充分混匀,配制成100μmol/L标准液使用,现用现配。(实验中每管需要100μL,为减小实验误差,故配制大体积。)
加样表:
试剂名称 | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
风干土样(g) | 0.02 | 0.02 | - | - |
试剂一(μL) | 5 | 5 | - | - |
振荡混匀,使土样润湿,室温放置15min | - | - | ||
试剂二(μL) | 80 | - | - | - |
试剂三(μL) | 100 | 100 | - | - |
混匀, 37℃水浴1h 后,立即沸水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水/冰浴冷却。 | - | - | ||
试剂二(μL) | - | 80 | - | - |
10000rpm 25℃离心10min,取上清液 | - | - | ||
上清液(μL) | 100 | 100 | - | - |
标准品(μL) | - | - | 100 | - |
蒸馏水(μL) | - | - | 100 | |
试剂四(μL) | 200 | 200 | 200 | 200 |
充分混匀,常温静置2min 后,测定吸光值A,分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA=A 测定管-A对照管,ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管设一个对照管。标准管和空白管只需做1-2次
三、S-α-GC 活力计算
单位的定义:每天每g土样中产生1μmol对-硝 基苯*定义为一个酶活力单位。
S-α-GC活力(U/g 土样)=ΔA÷ (ΔA标准÷C标准)×V反总÷W÷T=0.444×ΔA÷ΔA标准÷W
T:反应时间,1h=1/24d;V反总:反应体系总体积:1.85×10-4L;C标准:标准溶液浓度,100μmol/L;W:样本质量,g。
注意事项:
若ΔA<0.01,可延长37℃水浴时间;若ΔA>1.5,可将上清液稀释后进行测定;最后计算时注意各个因素的改变。
实验实例:
取两管0.02g三叶草土,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,用96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.421-0.238=0.183,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.473-0.047=0.426,计算酶活得:
S-α-GC活力(U/g 土样)=0.444×ΔA÷ΔA标准÷W=0.444×0.183÷ 0.426÷0.02=9.5366 U/g 土样。
取两管0.02g林土样,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,用96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.374-0.225=0.149,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.473-0.047=0.426,计算酶活得:
S-α-GC活力(U/g 土样)=0.444×ΔA÷ΔA标准÷W=0.444×0.149÷ 0.426÷0.02=7.7648 U/g 土样。
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