植物蔗糖酶检测试剂盒微量法BC0135-100T/48S-北京索莱宝科技有限公司

品牌	SOLARBIO/索莱宝	CAS	详询
分子式	详询	纯度	详询
分子量	详询	货号	BC0135
规格	100T/48S	供货周期	现货
主要用途	蔗糖酶（EC 3.2.1.26）是碳水化合物消化吸收的关键酶之一,能够水解蔗糖变	应用领域	环保,化工,生物产业,农业,综合

植物蔗糖酶活性检测试剂盒说明书
微量法
货号: BC0135
规格: 100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体60 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂一	液体2 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	粉剂×1支	2-8℃保存
试剂三	液体4 mL×1瓶	常温保存
标准品	粉剂×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

试剂二：用时加入1 mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 2-8℃保存一周；
标准品：用时加入1 mL蒸馏水充分溶解，制备10 mg/mL葡萄糖标准溶液待用；用不完的试剂2-8℃保存一周。

产品说明：
蔗糖酶（EC 3.2.1.26）是碳水化合物消化吸收的关键酶之一，能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收。
本试剂盒采用3,5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3,5-二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2、标准品的制备：
将标准品用蒸馏水稀释至2.5、2、1.5、1、0.8、0.6、0.4、0.2、0mg/mL（0mg/mL为空白管）。
3、加样表（在EP管中依次加入下列试剂）：

试剂名称（μL）	对照管	测定管	标准管
试剂一	15	15	15
蒸馏水	15	-	-

样本	30	30	-
标准品	-	-	30
试剂二	-	15	15
置于25℃准确水浴 10min
试剂三	30	30	30
混匀，100℃水浴 10min 左右（盖紧，防止水分散失），冷却至室温
蒸馏水	210	210	210

混匀，取200μL至微量玻璃比色皿或96孔板中测定各管540nm吸光值，ΔA=A 测定管-A对照管。（每个测定管需设一个对照管）

注意事项：
当A大于1.2时，建议将样本用提取液稀释后进行测定。
参考文献：

Karley A J, Ashford D A, Minto L M, et al. The significance of gut sucrase activity for osmoregulation in the pea aphid, Acyrthosiphon pisum[J]. Journal of insect physiology, 2005, 51(12): 1313-1319.

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