土壤谷氨*胺酶活性检测试剂盒 微量法

土壤谷氨*胺酶（S-GLS）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC3975
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前取1瓶加入6mL蒸馏水溶解，用不完的试剂2-8℃保存一周；

2. 试剂三：临用前根据样本量按比例（A:B=1:4）配制，现配现用；若发现变色后则不能再使用；

3. 标准品：10µmol/mL氮标准液。取15μL 10µmol/mL氮标准液，加入945μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.156μmol/mL的标准液待测。（实验中每管需要80μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

产品说明：
S-GLS（EC3.5.1.2）存在于某些细菌以及植物根中，催化谷氨*胺水解成谷*酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。

S-GLS催化谷氨*胺水解成L-谷*酸和氨，利用靛酚蓝比色法测定氨增加的速率，即可计算其酶活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、30~50目筛、研钵、甲苯（不允许快递）、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。
二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至630nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2. 样本测定（在EP管中加入下列试剂）

混匀，室温放置30min，630nm处读取吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管，计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。标准管与空白管只需测1-2次。

注意事项：

1. 当测定吸光值大于0.8时，建议将上清液用蒸馏水进一步稀释后测量。计算时乘以稀释倍数。

2. 离心后若上清液仍含有少量杂质，可将上清液再次10000g，常温离心10min去除。

实验实例：

1. 称取两管0.05g三叶草土，分别为测定管和对照管，按照测定步骤操作，用96孔板测定吸光值，计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.8-0.175=0.625，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.268-0.044=0.224，计算酶活得：

S-GLS（U/g 土样）=1.872×ΔA测定÷ΔA标准÷W=1.872×0.625÷0.224÷0.05=104.46 U/g 土样。

1. 称取两管0.05g林土样，分别为测定管和对照管，按照测定步骤操作，用96孔板测定吸光值，计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.466-0.164=0.302，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.268-0.044=0.224，计算酶活得：

S-GLS（U/g 土样）=1.872×ΔA测定÷ΔA标准÷W=1.872×0.302÷0.224÷0.05=50.477 U/g 土样。
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